| 研究課題/領域番号 |
22591620
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| 研究機関 | 帝京大学 |
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研究代表者 |
山田 昌興 帝京大学, 医学部, 准教授 (60287761)
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| 研究分担者 |
松野 彰 帝京大学, 医学部, 教授 (00242058)
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| キーワード | C6 cell / convection-enhanced delivery / glioblastoma / MGMT / micro-injectlon / spinal cord / temozolomide / tumor growth suppression |
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| 研究概要 |
ラットglioblastoma cellのC6をラットの頸髄に移植し、その後micorinjectorを用いて、temozolomide(TMZ)を腫瘍内に直接投与し、血液脳関門を介さない投与法により腫瘍増大抑制を図るのが目的である。まず、前段階として以下の実験を行った。
1. C6 cellにおける、TMZに耐性をもたらすMGMT発現の評価:培養C6 cell全てがMGMT陽性であったことから、TMZに対し耐性があることが予想された。
2. C6 cellに対する、TMZの至適濃度の決定:In vitroにてC6 cellを培養し、DMEM/F12培養液にTMZを加え、dose-response studyを行った。5回のD-R studyの結果、inhibitory concentration(IC_<50>)=80～100μMとの結果を得た。In vivoでは濃度が異なる可能性あるが、必要な濃度の目安とした。
3. ラットの皮下でのC6 cell成長抑制:C6 cellをラットの皮下に移植し、1週間後に皮下腫瘤を形成した。5日間、microinjectorを用いてTMZをゆっくりと腫瘍内に直接投与し、controlにはDMSO(TMZの溶解液)のみを投与した。100μMのTMZを使用したが、control群と比較し、腫瘍増大抑制効果は得られていない。In vivoでのTMZ活性を再度評価する必要がある。
4. Microinjectorを用いたC6 cellのラット脳内への移植:Microinjectorを用い、右に腫瘍入り培養液、左に培養液のみをゆっくり注入した。その後、1～5週まで、各週でラットをsacrificeし、脳組織を破壊せずに液体を注入できているか、移植された脳腫瘍が確実に着床し増大するかを確認した。その結果、培養液のみの注入では脳組織の破壊はなく、また、脳腫瘍も確実に成長する方法を確立した。
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