| 研究課題/領域番号 |
22591835
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
持丸 佳之 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80445238)
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| 研究分担者 |
久慈 直昭 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80169987)
浜谷 敏生 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (60265882)
福永 朝子 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (60464955)
井上 治 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (10464976)
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| キーワード | 移植・再生医療 / 細胞・組織 / 発生・分化 |
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| 研究概要 |
哺乳類の卵子細胞質形成過程を、主としてマウスをモデルとした各発育段階卵子の遺伝子発現解析を通して解析する事を目的とする本研究では、本年度、前年度の研究で得られた遺伝子発現解析結果より、パスウェイ解析等を用いて各発生段階で発現量に変化が見られる遺伝子あるいはパスウェイ遺伝子群について、これまで我々が用いてきたTaqman probeを用いたQPCR法により遺伝子発現量の検討を行った。
モデルとして若齢および加齢マウス単一卵子から抽出したmRNAおよびRibo-SPIA法による遺伝子増幅産物を用いて、第一に増幅後産物の遺伝子(両群でマイクロアレイによる解析上発現量に有意差が見られたSTAG2、STAG3、Aurka、Kif22、Anapc11、Ctnnb1、Cfl1、Tlr9)のRT-PCRを行い、マイクロアレイの結果を検証した。その結果、絶対値の比較でも、H1foo、Eef1a、GAPDHを内部標準とした相対的発現量の比較に於いても、差が見られる遺伝子とそうでない遺伝子が見られた。特にCfl1(加齢により発現量低下)、Anapc11(同、低下)、Aurka(同、上昇)について、統計上有意差が確認可能であった。
また28S-ribosomal RNA(以下28S)の内部標準としての有用性を検討した。その結果、28Sribosomal RNAの発現量はOvaryよりも卵で高く、他の遺伝子に比較して個体の加齢による各卵子内での発現量に差が少なく、これまで内部標準としていたEeF1αおよびH1fooの測定値は良好な相関がある事が明らかになった。28Sは卵子の特化した機能には関係がないことから、発育段階の異なる卵子に対して良好な内部標準となる可能性があることが明らかになった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
卵子の成熟過程に於ける発現解析は、ほぼ計画立案当初の計画に沿って推移しているが、新しい定量的PCR手法であるcDNA再利用法については、卵子遺伝子発現解析に信頼性を持ったデータを提供することは困難であることが明らかになってきている。ヒト単一卵子での同様な解析については、計画通り最終年度に検討予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後、次世代に遺伝子解析法として注目を集めている全遺伝子の直接シークエンス解析法(RNA-seq法)について、卵子で解析を行い、マイクロアレイの結果と比較することにより新たな知見を得る事を試みる。
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