| 研究課題/領域番号 |
22591986
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
越永 從道 日本大学, 医学部, 准教授 (70205376)
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| 研究分担者 |
杉藤 公信 日本大学, 医学部, 助教 (10328750)
大橋 研介 日本大学, 医学部, 助手 (10526065)
古屋 武史 日本大学, 医学部, 専修医 (20568539)
藤原 恭子 日本大学, 医学部, 助教 (40595708)
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| キーワード | 小児固形腫瘍 / ベックウィズウィードマン症候群 / 腎芽腫 / 小児外科 / PIポリアミド |
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| 研究概要 |
平成22年度はベックウィズヴィードマン症候群(BWS)のモデルマウスでKCQN1遺伝子の再発現が確認できたPIポリアミド化合物と同様に、ヒトBWSに対するPIポリアミド化合物を作製した。さらに使用するヒトBWS細胞株のcharacterizationを行った。
1.ヒトKCLQ1OT1プロモーター領域に存在するCCAAT配列へのPIポリアミド化合物の作製
ヒトKCLQ1OT1プロモーター領域に存在するCCMT配列を標的としたPIポリアミド化合物を作成した。同領域のCCMT配列に対する特異度を上げるために、CCAAT配列の一部を含む近傍に設計し、合計3種類のPIポリアミド化合物を作成した。
2.ヒトBWS細胞株のcharacterization
ヒトBWSの線維芽細胞株6種類中4種類に対してKCNQ1遺伝子の発現量を確認し、全ての細胞株で同遺伝子の発現がないことを確認した。さらにPIポリアミドの作用機序から、KvDMRのDNAが脱メチル化状態のもので効果があると考えられるため、MassARRAY epiTYPER法により同領域のメチル化の定量を行った。その結果2種類の細胞株で脱メチル化状態であることが確認できた。
3.PIポリアミド化合物の至適条件の確認
2.でcharacterizationされた細胞株2種類に対して1.で作製したPIポリアミド化合物を1μM、5μM投与した。24、48、72時間後に細胞を回収し、抽出したRNAからKCNQ1遺伝子の発現量を測定したところ、KCNQ1遺伝子の再発現は確認されなかった。
平成23年度は、引き続き新規のPIポリアミド化合物の作製および至適条件の検討を行うとともに、gel shift assayおよびビアコアによるPIポリアミド化合物の標的配列への結合能の確認を行っていく予定である。
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