| 研究課題/領域番号 |
22592094
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
末永 重明 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (00136889)
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| 研究分担者 |
富田 和男 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 助教 (60347094)
犬童 寛子 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 助教 (00301391)
馬嶋 秀行 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 教授 (60165701)
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| キーワード | エストロゲン / エストロゲンレセプター / ミトコンドリア / トランスフェクション / 蛍光免疫染色法 / Western blot / アンチオキシダント効果 / プロオキシダント効果 |
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| 研究概要 |
エストロゲン依存性疾患(炎症や悪性腫瘍)の治療において、エストロゲンレセプターやプロゲステロンレセプターの発現の有無は、治療効果を左右する極めて重要な因子である。ミトコンドリア内に存在するエストロゲンレセプター(α,β)の発現量が炎症や腫瘍病変のエストロゲン作用を左右し、さらに、ROS産生やアポトーシスに対するアンチオキシダント効果とプロオキシダント効果は、エストロゲン濃度に依存するのではないかと考え研究を行った。
材料と方法:初年度の平成22年度は、正常ヒト線維芽細胞(WI-38)とRA滑膜線維芽細胞を用いて、エストロゲンレセプタ-αの発現抑制細胞モデルを作成した。エストロゲンレセプターαの発現抑制については、市販されているエストロゲンレセプターsiRNAのコンストラクト(Santa Cruz社)を用いて、LipofectamineTM2000により細胞内に遺伝子の導入を行った。蛍光免疫染色法およびWestern blot法でエストロゲンレセプターα発現量を定性的・定量的に評価した。siRNA後のエストロゲンレセプターα発現量を親株細胞と比較検討した。
結果:WI-38およびRA滑膜細胞において、蛍光免疫染色法ではエストロゲンレセプターα蛋白はsiRNA3日後より抑制され、5日後で最も抑制された。Western blot法では、エストロゲンレセプターα蛋白は、siRNA後5日目で、親株細胞やcontrol siRNAを行った細胞と比較して約35%の抑制がみられた。
現在、エストロゲンレセプターの過剰発現細胞モデルの作成についても研究を進めている。
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