| 研究概要 |
歯内治療における病態の把握や根管充填時期決定における重要な要素として,根管内および根尖病巣における細菌の存在があり,歯内治療成功率を向上させるには,複雑な根管系および根尖病巣に存在する細菌の高精度な検出と適確な除去の確認が必須要件となる.根管・根尖病巣に存在する細菌の検出法として,現時点では根管内からサンプルを採取し嫌気培養によって判断する手法がとられている.しかしながら嫌気培養法は操作が煩雑であり判定までに時間がかかることや経済的側面から臨床現場への普及度は低く,多くの歯科医師は,いまだに病態の変化を患者の自覚・他覚症状から歯科医師が主観的に判断している.本研究では,電気化学的手法を応用した細菌由来プロテアーゼ活性および特異的遺伝子検出による迅速・確実な細菌検出システムの開発を目的としており,今年度はreal-timePCR法を用いた根尖性歯周炎原因菌の定量化方法の確立のために,Enterococcus faecalis等の難治性根尖性歯周炎の原因菌群のプライマーを作成し,各菌に歯内療法に用いられる各種薬剤を作用後、PCR阻害作用があり、かつ細胞膜透過性のない蛍光染色剤Propidium monoazide(PMA)を用いて染色し生菌と死菌を染め分けた後、リアルタイムPCR法によって測定し、生菌のみの染色体DNA濃度との相関を解析し、CFU count法等の従来の等生菌と死菌を判別する方法と比較することにより,リアルタイムPCR法を用いた根管内細菌の定量化の方法を確立した.
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究では,電気化学的手法を応用した細菌由来プロテアーゼ活性および特異的遺伝子検出による迅速・確実な細菌検出システムの開発を目的としており,今年度はPCRを用いた特異的遺伝子検出による細菌検出法の確立に関しては新たな知見が得られたが,歯内治療における電気化学的検出法の開発のための,細菌由来プロテアーゼあるいは特異的遺伝子を単離・精製するための細菌のライブラリー構築が今後の課題である.
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