舌・咀嚼筋の老化による委縮時のｍｉＲＮＡの役割と委縮予防法の探索

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22592171
• 研究機関: 鶴見大学
• 研究代表者: 菅 武雄 鶴見大学, 歯学部, 講師 (40247333)
• 研究分担者: 山根 明 鶴見大学, 歯学部, 教授 (20166763)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: 舌 / miRNA / Antisense / Real-time PCR / In situ hybridization

研究概要

miRNA解析のためのin situ hybridization法とAntisense Morpholino OligonucleotideによるmiRNA機能抑制のための実験条件を確立した。
胎齢12、13、14、15日マウス胎仔マウスより舌を摘出し、4%パラフォルムアルデヒドで固定した。舌まるごとまたは舌の中央付近の凍結切片上でDIGラベルしたプローブを用いたin situ hybridization 法によりmiR-1の舌筋組織内の分布を解析した。また、マウス胎仔より舌を摘出し、BGJb培養液を用いて器官培養を行った。培養液にmiR-1に対するAntisense Morpholino Oligonucleotideを添加し２、４日間培養した。培養終了後、舌よりmiRNAを分離・精製し、Real-time PCR法を用いてmiR-1の発現量を計測することによりAntisenseの抑制効果を確認した。さらに筋分化マーカーであるmyoD、myogenin、muscle creatine kinase(MCK)のmRNA発現量を計測した。
in situ hybridization法によりマウス胎仔舌筋細胞においてmiR-1が発現していることが明らかになった。舌の器官培養系において、miR-1の発現量は培養2日目から4日目の間に増加した。Antisense処理はこのmiR-1の増加を抑制した。myogenin、MCKの発現量は培養2日目から4日目の間に増加した。しかし、Antisense処理によってもこの増加は抑制できなかった。以上の結果より、miRNA解析のためのin situ hybridization法とAntisense Morpholino OligonucleotideによるmiRNA機能抑制のための実験条件が確立できたことが示された。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Role of occlusion in mouse masseter muscle acetylcholine receptor clustering (2013)
  • 著者名/発表者名: MORI, M., NARIYAMA, M., ABO, T., HIRAI, S., OGAWA, T., HAMADA, Y., YAMANE, A. and ASADA, Y.
  • 雑誌名: J. Dent. Res. 巻: 92 ページ: 352-357
  • DOI: 10.1177/0022034513476038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Age-related changes in rat genioglossus, geniohyoid, and masseter muscles (2013)
  • 著者名/発表者名: KANEKO, S., IIDA, R., SUGA, T., MORITO, M. and YAMANE, A.
  • 雑誌名: Gerodontology 巻: 未定 ページ: 未定
  • DOI: 10.1111/ger.12004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association between the lack of teeth and the expression of myosins in masticatory muscles of microphthalmic mouse (2012)
  • 著者名/発表者名: NARIYAMA, M., KOTA, Y., KANEKO, S., ASADA, Y. and YAMANE, A.
  • 雑誌名: Cell Biochem. Func. 巻: 30 ページ: 82-88
  • DOI: 10.1002/cbf.1821
  • 査読あり
• [雑誌論文] The function of platelet derived growth factor in the differentiation of mouse tongue striated muscle (2012)
  • 著者名/発表者名: SUZUKI, E., AOYAMA, K., FUKUI, T., NAKAMURA, Y. and YAMANE, A.
  • 雑誌名: Orthod. Craniofac. Res. 巻: 15 ページ: 39-51
  • DOI: 10.1111/j.1601-6343.2011.01535.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] IGF and myostatin pathways are respectively induced during the earlier and the later stages of skeletal muscle hypertrophy induced by clenbuterol, a b2-adrenergic agonist (2012)
  • 著者名/発表者名: ABO, T., IIDA, R., KANEKO, S., SUGA, T., YAMADA, H., HAMADA, Y. and YAMANE, A.
  • 雑誌名: Cell Biochem. Func. 巻: 30 ページ: 671-676
  • DOI: 10.1002/cbf.2848
  • 査読あり