| 研究概要 |
顎関節滑膜細胞の採取、単離とメカニカルストレスの及ぼす影響
(1)滑膜細胞の採取と培養
顎関節鏡視下手術、顎関節開放手術に際し得られた滑膜組織より滑膜細胞を単離、培養した。
採取した顎関節滑膜組織を培養。Outgrouthしてきた細胞を5継代培養。培養滑膜細胞として実験に使用。
(2)メカニカルストレスの負荷方法
メカニカルストレス(機械的圧縮刺激)を培養滑膜細胞に加え、負荷方法を検討した。
細胞への圧縮刺激は、当教室で作製した圧縮培養システムを用いて行う。このシステムは、培養皿上で培養した細胞にガラスシャーレを置いて圧縮刺激を加えるが、ガラスシャーレの重量により圧縮強度のコントロールが可能である。今回は、圧縮刺激を4g、8g、16gに設定し、刺激時間を24h、48h、72h、96hで検討した。
(3)圧縮刺激を加えた培養滑膜細胞の砿骨細胞騰導支持能と確骨細胞語導メカニズムの解析
健常人末梢血単球と培養滑膜細胞の共培養(rhM-CSF、1,25-(OH)2D3添加)の際、上記の圧縮刺激を加え、破骨細胞誘導を試み、形成されたTRAP陽性多核巨細胞数を評価した。また、培養滑膜細胞に圧縮刺激を加えた際のRANKLの発現についてRT-PCR法を用い、評価した。その結果、培養滑膜細胞と健常人末梢血単球との共培養による破骨細胞誘導系では、圧縮刺激を加えることによってTRAP陽性の多核巨細胞形成数が有意に増加し、また、RAML遺伝子発現は増強した。これらの結果から培養滑膜細胞は、圧縮刺激によりRABKLの発現を増強させることにより破骨細胞の形成を促進させることが明らかとなった。
(4)PGE_2産生に対するメカニカルストレスの影響
メカニカルストレスの変化で促進されるPGE_2産生のメカニズムを明らかにするために、PGE_2産生能評価した。顎関節培養滑膜細胞に上記メカニカルストレスを加え培養し、培養上清中のPGE2濃度をELISA法により測定した結果、メカニカルストレスを加えないcontrolに比べ、24,48,96hの16g圧縮刺激にてPGE2産生は増加した。
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