| 研究概要 |
ヒト正常舌角化細胞を用いたin vitro発がん系の確立
ウイルスベクター遺伝子導入技術を用いてヒトパピローマウイルス（HPV）16型陽性およびHPV陰性口腔がんのin vitro発癌モデルの作成を行った。HPV陽性モデルでは正常舌ケラチノサイトにハイリスクタイプHPV16型のE6とE7遺伝子はがん化の最も初期のハードルである不死化に必須であり、H-rasおよびc-myc遺伝子の活性化でがん化することが分かった。HPV陰性系のがん化ではhTERT, cyclinD1, CDK4に加えてp53の不活化が必須であることが確認された。遺伝子樹立された癌細胞はコロニー形成法、ヌードマウス造腫瘍能、raft cultureによる3次元培養法により、がんとしての性質を獲得したことを確認した。すなわち、HPV16E6E7もしくはそれと等価の遺伝子を導入し、pRb経路、p53経路の不活性化、テロメラーゼを活性化した細胞にHRAS変異またはEGFR活性に加え、MYCを過剰発現させると正常細胞が腫瘍細胞へと形質転換を起こすことが示された。
口腔および中咽頭がん腫瘍組織におけるHPVの関与
口腔および中咽頭側壁（扁桃原発）癌の病理組織診断のための組織採取を行う際に組織の一部を－80℃で保存し、DNAを抽出、採取したDNAをmultiplex PCR ®(KURABO Industries) を用いて解析し、ハイリスクHPVの発現を検討した。その結果、中咽頭がんのでは約30%の腫瘍でHPV16型の関与が確認されたが、口腔がんにおけるHPVの関与は認められず、口腔発がんにおけるHPVの関与は極めて低いと考えられた（in press）。
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