研究課題
コレステロールや鉄、ビタミン12などの栄養素などの血中輸送担体の多くは、レセプターを介してエンドサイトーシスされ細胞内に取り込まれます。このエンドサイトーシスに必要な配列はレセプターの細胞質ドメインに高度に保存されるFD/ENPVY配列により担われています。本研究ではFD/ENPVY配列を有する未同定のレセプターの塩基配列をもとに、融合タンパクを発現・精製し、このタンパクをアフイニテイクロマトとして用いて、そのリガンドを精製・同定することを目指します。さらに、同定されたリガンドである新しい血中輸送担体の機能を可溶性レセプター融合タンパクを用いて解析し、肥満や糖尿病、動脈硬化などの食習慣病研究にフィードバックすることを目的にしています。イン・シリコにて、FD/BNPVY配列を有するタンパクをコードする遺伝子のゲノムワイド・スクリーニングと発現レベル、臓器特異性、遺伝子リンケージなどを解析し、数個の代表的候補遺伝子を同定しました。また、his-mycタグを有するモデルタンパクをコードするcDNAをHEK293細胞に導入し、最も高く発現する細胞をクローニングしました。この高発現細胞を用いて、myc-抗体とmyc-ペプチドを用いて特異的に精製することを可能にしました。FD/ENPVY配列はDab1などのタンパクにも結合することから、現在、リガンド以外に、細胞内ドメインにも結合するタンパクも含めて、LC-MS-MSを用いて、同定することを検討中です。
すべて 2011
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Biochem Biophys Res Commun.
巻: 印刷中(未定)
