機能的ペプチド配列から構成される人工蛋白質を用いた腫瘍免疫法の開発

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22650231
• 研究機関: 東京慈恵会医科大学
• 研究代表者: 伊藤 正紀 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (80297366)
• 研究分担者: 本間 定 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (50192323) ; 小井戸 薫雄 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (70266617)
• キーワード: 細胞性免疫 / 腫瘍免疫 / 人工タンパク質 / 液性免疫 / OVA

研究概要

我々は、モデル抗原としてOvalbumin(OVA)を用い、OVAのMHC class IとMHC class IIエピトープ配列、αヘリックス構造などのタンパク質安定化配列、無作為配列などのペプチドモチーフ配列がコンビナトリアル(組合せ的)に、多数繰返した人工タンパク質ライブラリーを作成した、この中から、人工タンパク質32種類を精製し、抗原提示細胞(樹状細胞)に添加し、OVA特異的エピトープを認識するT細胞と共培養、IL-2産生能を測定する事で細胞性免疫の誘導能を評価した。その結果、0.5μMの濃度でクローンF182AおよびF37Aで細胞性免疫誘導が認められた。OVAでは、50μM以上の濃度でないと細胞性免疫誘導能は認められなかった。このように、我々はOVAよりも100倍もの低濃度で、タンパク質のみで強い細胞性免疫を誘導できる人エタンパク質の創製に成功した。マウスにこれらの人工タンパク質を投与し免疫誘導能を評価した。その結果、テトラマーアッセイ、細胞障害性アッセイにおいて、in vivoにおいても、人工タンパク質はOVAに対する細胞性免疫誘導能を持つ事が明らかになった。人工タンパク質を免疫後、OVAを発現する腫瘍細胞EG7-OVAを皮下投与し、腫瘍の成長を測定した。その結果、F182AおよびF37A投与群では、非免疫群と比較して、腫瘍増殖の抑制が認められた。さらに、免疫マウスの血清を採取し、ELISA法にて抗OVA抗体の誘導能について評価した結果、抗OVA抗体が誘導されており、人工タンパク質はOVAに対する液性免疫も誘導できる事がわかった。本研究により、我々は、アジュバンドを用いずに、タンパク質のみで、腫瘍免疫療法の本体である細胞性免疫を誘導可能にする、革新的な腫瘍免疫療法を開発するうえでのモデル抗原タンパク質を用いた概念証明実験に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Immunotherapy synergizes with chemotherapy targeting pancreatic cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Koido S, Homma S, Ito M, et al
  • 雑誌名: Immunotherapy 巻: 4 ページ: 5-7
  • DOI: 10.2217/imt.11.150
  • 査読あり
• [雑誌論文] Current immunotherapeutic approaches in pancreatic cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Koido S., Homma S., Ito M., et al.
  • 雑誌名: Clin Dev Immunol 巻: 267539 ページ: 1-15
  • DOI: DOI:10.1155/2011/267539
  • 査読あり
• [雑誌論文] Gemcitabine enhances Wilms' tumor gene WT1 expression and sensitizes human pancreatic cancer cells with WT1-specific T-cell-mediated antitumor immune response (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahara A, Koido S, Ito M, NagasakiE, Sagawa Y, Iwamoto T, Komita H, Ochi T, Fujiwara H, Yasukawa M, Mineno J, Shiku H, Nishida S, Sugiyama H, Tajiri H, Homma S
  • 雑誌名: Cancer Immunol Immunother 巻: 60(9) ページ: 1289-1297
  • DOI: DOI:10.1007/s00262-011-1033-3
  • 査読あり
• [雑誌論文] Immunologic Monitoring of Cellular Responses by Dendritic/Tumor Cell Fusion Vaccines (2011)
  • 著者名/発表者名: Koido S, Homma S, Ito M, et al
  • 雑誌名: Journal of Biomedicine and Biotechnology 巻: 2011,910836 ページ: 1-14
  • DOI: 10.1155/2011/910836
  • 査読あり
• [備考]
  • URL: http://www.jikei.ac.jp/academic/course/17_akuseisyuyo.html