研究課題
宿主の血液を唯一の栄養源とするマダニは、人や動物にはない吸血生理を支える多彩な代謝経路が存在すると考えられているが、現在マダニの生存や繁殖の恒常性維持の基軸経路は未解明である。我々は、マダニ個体の血液消化の中枢である中腸上皮細胞のヘモグロビン分解経路(HbDCによる蛋白代謝システムが、病原体の伝播に重要な役割を担っていることを想定し、マダニが進化的に獲得したこの多様性の解明が、マダニ制圧の方策転換を強く方向づけできるもので、その結果、有用・応用性に新領域をもたらすことができると考える。最終年度はまず、in vivoモデルを用いたHbDCのバベシア原虫伝播ネットワークの解明を行った。(1)マダニアレイ解析:飽血まで経時的に回収し、全RNAを抽出後、マダニアレイとのハイブリダイゼーション解析を行い、原虫感染ダニと非感染ダニを比較し、上皮細胞への原虫侵入後から脱出までのHbDC参画分子、インヒビター発現誘導の変化を吸血の時間軸に沿って解析した。(2)可視化解析:経時的に固定した中腸標本あるいはマイクロダイセクションで分離して単一上皮細胞を、抗HbDC参画分子抗体と抗インヒビター抗体を用いて多重染色を行い、原虫の移動に伴う内在型HbDC参画分子と内在型インヒビターの局在を時間軸に沿って解析し、リソゾーム、細胞外への分泌が想定される分子については免疫電顕を用いた局在解析を行った。(3)定量解析:イムノブロットと抗HbDC参画分子抗体と抗インζビター抗体を用いて、内在型HbDC参画分子と内在型インヒビターの発現量の変化を調べた。(4)パスウエイ解析:(1)の遺伝子発現の定量的解析をもとに、HbDC参画分子の変動とHbDC参画分子以外の中腸遺伝子群との相関を解析した。(5)蛋白分解酵素とインヒビター群が協調的に機能することにより、ヘモグロビンをアミノ酸に分解するHbDCが、中腸における病原体伝搬ネットワークシステムの中心的役割を果たしていることを見出した。
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Mol Biochem Parasitol
巻: 182 ページ: 45-53
10.1016/j.molbiopara.2011.12.002
Biochem Biophys Res Commun
巻: 413 ページ: 599-604
10.1016/j.bbrc.2011.09.009
http://www.niah.affrc.go.jp/collab/person/tsuji/index.html
