研究課題
我々は、C型肝炎ウイルス(HCV)細胞培養系を用いて、マウス型感染レセプターを発現した細胞で感染・共培養・経代を繰り返すことによるウイルスエンベロープ蛋白の適応化により、未だ報告されていないマウス指向性HCV株を作成し、HCV感染マウスモデルを樹立することを目的として本研究を遂行した。本年度はHCV-JFH1ウイルス培養系を改変しNS5A領域C末端に2種の蛍光蛋白(eYFPおよびAsRed)をそれぞれ挿入し、ウイルス粒子分泌能を保持する適応変異をNS5AおよびNS3領域にそれぞれ挿入した蛍光ウイルスを構築し、感染増殖能、ウイルス粒子分泌能を検証した。作成されたウイルスはHuh7細胞にて高効率に増殖し培養上清を非感染細胞に添加することにより感染が確認された。蛍光ウイルスの感染はウイルス感染レセプターであるCD81に対する抗体を添加することにより阻害された。またインターフェロンα、プロテアーゼ阻害薬処理によりウイルスの細胞内増殖が有意に低下した。本ウイルスの長期の感染培養により安定してウイルス蛋白・蛍光蛋白を発現する細胞下部を樹立し得た。本研究の成果によりウイルス-宿主感染免疫応答の解析、さらに種々の遺伝子導入・改変マウスを用いた生体におけるHCV感染分子機構の解析など広範な応用展開を目指す。
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