インプリンティング遺伝子のゲノムワイドな同定法の開発と小児固形腫瘍解析への応用

2011 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22659196
• 研究機関: 群馬県衛生環境研究所
• 研究代表者: 林 泰秀 群馬県衛生環境研究所, 研究企画係, 研究員 (30238133)
• 研究分担者: 朴 明子 群馬県衛生環境研究所, 研究企画係, 研究員 (50450375) ; 大木 健太郎 群馬県衛生環境研究所, 研究企画係, 研究員 (50400966)
• キーワード: 遺伝子 / ゲノム / マイクロアレイ / 癌 / インプリンティング

研究概要

今年度は、横紋筋肉腫(RMS)50検体(細胞株8株、新鮮腫瘍42例)を用い、発現解析、変異解析、SNPアレイによるゲノムコピー数の解析を行った。またALK阻害剤による、細胞株の増殖抑制効果も検討した。RT-PCRを施行した29検体中17検体(59%)でALKの高発現を確認し、SNPアレイでは胞巣型の1例でALK領域の高度増幅を検出した。この例では同時にPAX3とFKHR領域の高度増幅も検出されたが、ALK遺伝子の変異は検出されなかった。ALK阻害剤により一部の細胞株で増殖抑制効果が認められた。ALKはRMSで高率に発現し、高度増幅例も認められたことからRMSの発症・進展に関与している可能性が示唆された。
NOTCHシグナルは細胞増殖に関与し、白血病や脳腫瘍で異常が報告されているが、小児固形腫瘍への関与は不明である。今回、小児固形腫瘍の細胞株70株(神経芽腫40株、Ewing肉腫17株、RMS13株)、新鮮腫瘍248例(神経芽腫131例、Ewing肉腫56例、RMS61例)のNOTCH1/2の変異解析および発現解析を行った。またsi-RNAによるノックダウンの系を用いてNOTCHシグナルの細胞増殖に及ぼす影響を検討した。変異解析ではNOTCH1/2のHD domainとPEST domainに9個の一塩基置換を認めた。si-RNAによりNOTCHシグナルをノックダウンした結果、変異NOTCHを発現する細胞株では野生型NOTCHを発現する細胞株に比べて著しい細胞増殖制御効果が確認された。NOTCHシグナルは一部の小児固形腫瘍の発症・進展に関与する可能性が示唆され、今後小児固形腫瘍の新たな治療標的となる可能性がある。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

昨年度はALKのEwing肉腫における解析を行い、今年度は横紋筋肉腫における意義を検討した。さらにNOTCHシグナルの小児固形腫瘍における意義も検討し、研究は順調に進展している。

今後の研究の推進方策

次年度は小児固形腫瘍におけるIDH1、IDH2の解析とALKの詳細な機能解析を行う予定である。また次世代シーケンサーを用いたエクソーム解析も行う予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of TRIB1 R107L gain-of-function mutation in human acute megakaryocytic leukemia (2012)
  • 著者名/発表者名: Yokoyama T, Toki T, Aoki Y, Kanezaki R, Park MJ, Kanno Y, Takahara T, Yamazaki Y, Ito E, Hayashi Y, Nakamura T
  • 雑誌名: Blood 巻: 119 ページ: 2608-2611
  • DOI: doi: 10.1182/blood -2010-12-324806
  • 査読あり
• [雑誌論文] CBL mutation in chronic myelomonocytic leukemia secondary to familial platelet disorder with propensity to develop acute myeloid leukemia (2012)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, Hasegawa D, Park MJ, Murata C, Matsubara A, Ogawa C, Manabe A, Arakawa H, Ogawa S, Hayashi Y
  • 雑誌名: Blood 巻: 119 ページ: 2612-2614
  • DOI: doi: 10.1182/blood-2011-02-333435
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNMT3A mutations are rare in childhood acute myeloid leukaemia, myelodysplastic syndromes and juvenile myelomonocytic leukaemia (2012)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, Taki T, Park MJ, Shimada A, Sotomatsu M, Adachi S, Tawa A, Horibe K, Tsuchida M, Hanada R, Tsukimoto I, Arakawa H, Hayashi Y
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: 156 ページ: 413-414
  • DOI: doi: 10. 1111/j.1365-2141.2011.08879.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] CBL mutations in infant acute lymphoblastic leukaemia (2012)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, Park MJ, Taki T, Takita J, Hiwatari M, Kanazawa T, Sotomatsu M, Ishii E, Arakawa H, Ogawa S, Hayashi Y
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: 156 ページ: 672-674
  • DOI: doi: 10.1111/ j.1365-2141.2011.08900.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Clinical significance of early T-cell precursor acute lymphoblastic leukaemia : Results of the Tokyo Children's Cancer Study Group Study L99-15 (2012)
  • 著者名/発表者名: Inukai T, et al
  • 雑誌名: Brit J Haematol 巻: 156 ページ: 358-365
  • DOI: 10.1111/j.1365-2141.2011.08955.x.Epub2011Nov30
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aberrations of NEGR1 on 1p31 and MYEOV on 11q13 in neuroblastoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Takita J, Chen Y, Okubo J, Sanada M, Adachi M, Ohki K, Nishimura R, Hanada R, Igarashi T, Hayashi Y, Ogawa S
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 102 ページ: 1645-1650
  • DOI: doi: 10.1111/j.1349-7006.2011.01995.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] CBL mutation in childhood therapy-related leukemia (2011)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, Taki T, Park MJ, Nagasawa M, Kanazawa T, Takita J, Ohnishi H, Sotomatsu M, Arakawa H, Hayashi Y
  • 雑誌名: Leukemia 巻: 25 ページ: 1356-1358
  • DOI: doi: 10.1038/leu.2011.75.
  • 査読あり
• [雑誌論文] IDH1 and IDH2 mutations are rare in pediatric myeloid malignancies (2011)
  • 著者名/発表者名: Oki K, Takita J, Hiwatari M, Nishimura R, Sanada M, Okubo J, Adachi M, Sotomatsu M, Kikuchi A, Igarashi T, Hayashi Y, Ogawa S
  • 雑誌名: Leukemia 巻: 25 ページ: 382-384
  • DOI: doi: 10.1038/leu.2010.307
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oncogenic mutations of ALK in neuroblastoma (2011)
  • 著者名/発表者名: Ogawa S, Takita J, Sanada M, Hayashi Y
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 102 ページ: 302-308
  • DOI: doi: 10.1111/j.1349-7006. 2010.01825.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Different cytokine profile and eosinophil activation are involved in rhinovirus-and RS virus-induced acute exacerbation of childhood wheezing (2011)
  • 著者名/発表者名: Kato M, et al
  • 雑誌名: Pediatr Allergy Immunol 巻: 22 ページ: e87-94
  • DOI: 10.1111/j.1399-3038.2010.01026.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differential effects of corticosteroids on serum eosinophil cationic protein and cytokine production in rhinovirus- and respiratory syncytial virus-induced acute exacerbation of childhood asthma (2011)
  • 著者名/発表者名: Kato M, et al
  • 雑誌名: Int Arch Allergy Immunol 巻: 155Suppl1 ページ: 77-84
  • DOI: 10.1159/000327434
  • 査読あり
• [雑誌論文] Eosinophilic gastrointestinal disorders in infants : a Japanese case series (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamada Y, et al
  • 雑誌名: Int Arch Allergy Immunol 巻: 155Suppl1 ページ: 40-45
  • DOI: 10.1159/000327264
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chromosome abnormalities in advanced stage T-cell lymphoblastic lymphoma of children and adolescents : a report from Japanese Paediatric Leukaemia/Lymphoma Study Group (JPLSG) and review of the literature (2011)
  • 著者名/発表者名: Sekimizu M, et al
  • 雑誌名: Br J Haematol 巻: 154 ページ: 612-617
  • DOI: 10.1111/j.1365-2141.2011.08788.x.Epub2011Jun21
  • 査読あり
• [雑誌論文] RAS mutations are frequent in FAB type M4 and M5 of acute myeloid leukemia, and related to late relapse : a study of the Japanese Childhood AML Cooperative Study Group
  • 著者名/発表者名: Sano H, et al
  • 雑誌名: Int J Hematol 巻: (in press)
  • DOI: 10.1007/s12185-012-1033-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel splicing factor mutations in juvenile myelomonocytic leukemia
  • 著者名/発表者名: Takita J, et al
  • 雑誌名: Leukemia 巻: (in press)(Epub ahead of print)
  • DOI: 10.1038/onc.2011.616.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aberrant activation of ALK kinase by a novel truncated form ALK protein in neuroblastoma
  • 著者名/発表者名: Okubo J, et al
  • 雑誌名: Oncogene 巻: (in press)(Epub ahead of print)
  • DOI: 10.1038/onc.2011.616.
  • 査読あり
• [学会発表] 再発後にMLL-AF4陽性となったB前駆型急性リンパ性白血病の1例 (2012)
  • 著者名/発表者名: 大木健太郎, 他
  • 学会等名: 日本血液学会第167回例会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-03-03
• [学会発表] NUP98-NSD1 fusion gene is strongly associated with a poor prognosis in pediatric acute myeloid leukemia : a study of the Japanese Childhood AML99 Cooperative Study Group (2011)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, et al
  • 学会等名: 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 20111209-20111213
• [学会発表] The Concurrent mutations in hematological malignancies with NUP98-fusion genes are associated with clinical prognosis (2011)
  • 著者名/発表者名: Taketani T, et al
  • 学会等名: 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 20111209-20111213
• [学会発表] JAK2 mutations and CRLF2 rearrangements in down syndrome associated acute lymphoblastic leukemia in Japan (2011)
  • 著者名/発表者名: Hanada I, et al
  • 学会等名: 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 20111209-20111213
• [学会発表] Heterogeneity in infants with acute myeloid leukemia : retrospective analysis of a Japanese nationwide survey (2011)
  • 著者名/発表者名: Shimada A, et al
  • 学会等名: 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 20111209-20111213
• [学会発表] GATA1 mutants lacking Rb-binding motif observed in transient abnormal myelopoiesis in down syndrome (2011)
  • 著者名/発表者名: Toki T, et al
  • 学会等名: 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: San Diego
  • 年月日: 20111209-20111213
• [学会発表] TCCSG小児B前駆細胞型急性リンパ性白血病におけるCRLF2とIKZF1の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大木健太郎, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-27
• [学会発表] ダウン症候群関連ALLの発症におけるJAK2、およびCRLF2遺伝子異常の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 花田勇, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-27
• [学会発表] 小児固形腫瘍組織におけるI型インスリン洋増殖因子受容体(IGF-1R) (2011)
  • 著者名/発表者名: 若井公子, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-27
• [学会発表] 小児固形腫瘍におけるIDH1/2変異の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保淳, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-27
• [学会発表] ASPL-TFE3キメラ遺伝子にて診断確定を得た膣原発alveolar soft part sarcomaの一例 (2011)
  • 著者名/発表者名: 新井心, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-27
• [学会発表] 次世代シークエンサによる神経芽腫のエクソーム解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 西村力,林泰秀
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-26
• [学会発表] Gene expression profiles of early T-cell precursor (ETP-) ALL and T-ALL treated in TCCSG trials (2011)
  • 著者名/発表者名: 清河信敬, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-26
• [学会発表] t(9;17)(p24;q23)を伴うJAK2遺伝子関連急性リンパ性白血病の遺伝子解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 川村眞智子, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-26
• [学会発表] 乳児AMLの後方視的解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 嶋田明, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] 小児急性白血病におけるDNMT3A遺伝子変異の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 柴徳生, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] 小児急性骨髄性白血病におけるNUP98-NSD転座の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 柴徳生, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] 染色体11p15異常を有する造血器腫瘍における遺伝子変異と臨床像の関連 (2011)
  • 著者名/発表者名: 竹谷健, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] 東京小児がんグループ(TCCSG)ALL治療研究登録症例の網羅的遺伝子発現解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 飯島一智, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] T細胞型小児急性リンパ性白血病における遺伝子異常の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 朴明子, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] MLL再構成陽性の小児急性リンパ性白血病のエクソーム解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 堤修一, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] 乳児白血病におけるIDH1およびIDH2遺伝子の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 樋渡光輝, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] ダウン症候群に合併した一過性骨髄増殖症(TAM)および急性巨核芽球性白血病(AMKL)の全エクソンシーケンス (2011)
  • 著者名/発表者名: 吉田健一, 他
  • 学会等名: 第53回日本小児血液・がん学会学術集会
  • 発表場所: 前橋
  • 年月日: 2011-11-25
• [学会発表] CBL mutation in CMML secondary to familial platelet disorder with propensity to develop AML (2011)
  • 著者名/発表者名: Shiba N, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] Molecular characteristics of early T-cell precursor (ETP) ALL and T-ALL treated in TCCSG trials (2011)
  • 著者名/発表者名: Kiyokawa N, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] Novel GATA1 mutants with internal deletions in transient abnormal myelopoiesis in down syndrome (2011)
  • 著者名/発表者名: Toki T, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] Whole exome analysis of transient abnormal myelopoiesis and acute megakaryocytic leukemia with Down syndrome (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida K, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] The clinical significance of LEF1 mutation in childhood acute lymphblastic leukemia (2011)
  • 著者名/発表者名: Park MJ, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] Mutation analysis for IDH1 and IDH2 in infantile leukemia (2011)
  • 著者名/発表者名: Hiwatari M, et al
  • 学会等名: 第73回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-14
• [学会発表] 次世代シーケンサーによる神経芽腫のエクソーム解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 西村力,林泰秀
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-04
• [学会発表] 小児T細胞性急性リンパ性白血病におけるLEF1遺伝子の異常と臨床像について (2011)
  • 著者名/発表者名: 朴明子, 他
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-04
• [学会発表] 小児固形腫瘍におけるIDH変異の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保淳,大木健太郎,林泰秀
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011-10-03
• [学会発表] 神経芽腫における部分欠損型ALKの造腫瘍性に関する検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保淳,大木健太郎,林泰秀
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-14
• [学会発表] 高密度SNPアレイを用いた胸膜肺芽腫における網羅的ゲノム解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大久保淳,大木健太郎,林泰秀
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-14
• [学会発表] 治療関連白血病と乳児白血病におけるCBL遺伝子変異の解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 柴徳生, 他
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-13
• [学会発表] 革新的ゲノム解析技術を用いた難治性小児固形腫瘍における発症分子機構の解明 (2011)
  • 著者名/発表者名: 滝田順子,林泰秀
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-12
• [学会発表] 神経芽腫における全エクソン領域のシークエンス解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 安達正時,大木健太郎,林泰秀
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-12
• [学会発表] ダウン症候群に合併した一過性骨髄異常増殖症153例の後方視的解析 (2011)
  • 著者名/発表者名: 村松秀城, 他
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-12
• [学会発表] TAMにおける遺伝学的基盤探索 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小川誠司, 他
  • 学会等名: 第114回日本小児科学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-08-12