| 研究概要 |
NLR遺伝子のホモログである植物の耐病遺伝子は,感染を許した細胞自身が細胞死に陥るとともに,炎症を惹起することで病原微生物の脅威に対抗している。NLR遺伝子の1つであり,家族性寒冷蕁麻疹の原因遺伝子であるNLRP3の活性化によっても,インフラマソームを介したIL-1βの活性化によって誘導される炎症に加えて,アポトーシスとは異なる経路でネクローシス様のプログラム細胞死が誘導される。しかし,その実態はカテプシン阻害剤として知られるCA074Meによって抑制されること以外は分かっていない。
本研究では。NLR疾患変異遺伝子の発現と誘導される細胞死を人為的に制御できる系を確立するため,NLRP3の疾患関連変異体および野生型を,標識のためのGFPとのキメラ蛋白として作成し,発現を人為的に制御するためにテトラサイクリン誘導系として構築した。これをウイルス上清を用いてマウス肥満細胞株に導入し,安定発現株を樹立した。野生型NLRP3を導入した細胞は,ドキシサイクリン(Dox)添加によりGFPの発現が誘導された。疾患関連変異体を導入した細胞では,Dox添加によりネクローシス様の細胞死が誘導され,その細胞死はCA074Meの添加により抑制された。この様に,人為的にNLRP3の発現を誘導し,それに伴って目的とするネクローシス様の細胞死を誘導する細胞を樹立することができた。引き続き,この樹立した細胞を用いて検討を加えることで,NLRP3の活性化によって誘導されるネクローシス様の細胞死の分子機序を明らかにしていく。
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