高齢者蝸牛細胞の遺伝子発現解析による老人性難聴の病態解明

2012 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22659305
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 喜多村 健 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90010470)
• 研究分担者: 木村 百合香 東京都健康長寿医療センター, 研究所, 研究員 (40450564) ; 野口 佳裕 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 講師 (50282752)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• キーワード: 遺伝子 / 医療・福祉 / 神経科学 / 脳・神経

研究概要

① 剖検時に採取した高齢者のヒト蝸牛標本の細胞から、レーザキャプチャー・マイクロダイセクションを用い、難聴遺伝子COCH mRNAを抽出・解析し、加齢による組織変化との関連を検討し、加齢に特徴的な分子病理学的変化の有無を同定し、老人性難聴発症・進行の予防法を模索する研究である。
② 免疫組織学研究の対象は、10症例 (平均年齢80.8歳)の側頭骨標本で、 前期高齢者5耳（69.4±3.6 歳、63～72歳）、超高齢者5耳（92.2±2.9 歳、90～97歳）の2群に分けて解析した。
③ 採取した側頭骨をパラフィン包埋し、6μmの厚さの切片を作成し、cochlinの免疫染色を施行し、基底回転外側壁におけるcochlin陽性部位の相対面積率を解析した。
④ 超高齢者の基底回転ラセン靱帯におけるcochlinは、びまん性に発現しており、陽性面積率は前期高齢者において46.8%であったのに対し、超高齢者では53.9%と超高齢者群においてcochlin陽性面積の占める割合が高い傾向にあった。
⑤ 次に、COCH mRNAとSLC26A5 mRNAの相対定量解析手法を開発するために、明らかな難聴を認めない70歳、71歳、71歳の３例のホルマリン固定側頭骨のパラフィン包埋切片を作成し、Leica LMDを用い、レーザキャプチャー・マイクロダイセクションの手法でラセン靱帯、ラセン神経節細胞、血管条、外有毛細胞を採取し、各細胞からRNA抽出を行い、COCH mRNA とSLC26A5 mRNAを解析した。
⑥ COCH mRNAはラセン靱帯と血管条に、SLC26A5 mRNAは外有毛細胞のみの発現が確認され、本手法が、ヒト側頭骨標本の個々の細胞からのmRNA解析を可能とすることを証明し、我々の研究により、老人性難聴の病態解明において重要なツールとなる蝸牛のmRNA解析法が確立された。

現在までの達成度 (区分)

理由

24年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

24年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] RNA analysis of inner ear cells from formalin fixed paraffin embedded (FFPE) archival human temporal bone section using laser microdissection. -A technical report. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kimura Y, Kubo S, Koda H, Shigemoto K, Sawabe M, Kitamura K.
  • 雑誌名: Hear Res 巻: accepted ページ: accepted
  • 査読あり
• [雑誌論文] Anatomical feature of the middle cranial fossa in fetal periods: possible etiology of superior canal dehiscence syndrome. (2012)
  • 著者名/発表者名: Takahashi N, Tsunoda A, Shirakura S, Kitamura K
  • 雑誌名: Acta Otolaryngol 巻: 132 ページ: 385-90
  • DOI: doi:10.3109/00016489.2011.637234
  • 査読あり
• [雑誌論文] Longitudinal study of 29 patients with Meniere’s disease with follow-up of 10 years or more (In commemoration of Professor Emeritus Isamu Watanabe) (2012)
  • 著者名/発表者名: Sumi T, Watanabe I, Tsunoda A, Nishio A, Komatsuzaki A, Kitamura K
  • 雑誌名: Acta Otolaryngol 巻: 132 ページ: 10-15
  • DOI: 10.3109/00016489.2011.627570
  • 査読あり
• [雑誌論文] Extended screening for major mitochondrial DNA point mutations in patients with hereditary hearing loss (2012)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Nishigaki Y, Noguchi Y, Fuku N, Ito T, Mikami E, Kitamura K and Tanaka M
  • 雑誌名: J Hum Genet 巻: 57 ページ: 772-775
  • DOI: 10.1038/jhg.2012.109
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mitochondrial DNA haplogroup associated with hereditary hearing loss in a Japanese population (2012)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Fuku N, Noguchi Y, Murakami H, Miyachi M, Kimura Y, Tanaka M and Kitamura K
  • 雑誌名: Acta Otolaryngol 巻: 132 ページ: 1178-1182
  • DOI: 10.3109/00016489.2012.693624
  • 査読あり
• [学会発表] Gene Expression Analysis of Inner Ear Cells from Formalin Fixed Paraffin Embedded Archival Temporal Bone Section using Laser Microdissection. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kimura Y, Kubo S, Shigemoto K, Koda H, Sawabe M, Kitamura K
  • 学会等名: The First Asian Otology Meeting & The 3rd East Asian Symposium on Otology
  • 発表場所: 長崎、日本
  • 年月日: 20120602-20120603
• [学会発表] Mechanotransduction in Inner Ear Hair Cells Requires Transmembrane Channel-Like Genes 1 or 2 (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawashima Y, Geleoc G SG, Kurima K, Labay V, Lelli A, Asai Y, Makishima T, Wu D-K, Della Santina CC, Kitamura K, Holt JR, Griffith AJ
  • 学会等名: The First Asian Otology Meeting & The 3rd East Asian Symposium on Otology
  • 発表場所: 長崎、日本
  • 年月日: 20120602-20120603
• [学会発表] Mitochondrial DNA Haplogroup Analysis Associated with Presbycusis in a Japanese Population (2012)
  • 著者名/発表者名: Kato T, Fuku N, Kimura Y, Tanaka M, Kitamura K
  • 学会等名: The First Asian Otology Meeting & The 3rd East Asian Symposium on Otology
  • 発表場所: 長崎、日本
  • 年月日: 20120602-20120603
• [図書] 言語聴覚士のための聴覚障害学 (2012)
  • 著者名/発表者名: 喜多村 健（ 編著）
  • 総ページ数: 228
  • 出版者: 医歯薬出版株式会社
• [図書] 第7章：聴覚・平衡機能系疾患の医療ニーズ 第3節特発性両側性感音難聴．稀少疾患/難病の診断・治療と製品開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 喜多村 健
  • 総ページ数: 4
  • 出版者: 技術情報協会
• [備考] 東京医科歯科大学医歯学総合研究科 耳鼻咽喉科学教室
  • URL: http://www.tmd.ac.jp/oto/