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本研究では、タンパク質フォールディング研究において、新規に「リアルタイム変性・巻き戻りプロテオリシス法」を提案し、タンパク質の変性・巻き戻り過程の重要部位の同定やそれらの構造物性解析に取り組んだ。
本年度は、プロテアーゼ分解により生成したフォールディング中間体である断片と同じものを遺伝子操作により作製し、その構造物性を引き続き測定した。さらに、Tk-RNase HIIとホモログのSto-RNase HIIについても同様の分解実験を実施した。
これらの実験を通して、Tk-RNase HIIの遅い変性過程の経路を同定することができた。Tk-RNase HIIは、天然状態において、2種類の構造を有しており(NとN')、N構造はプロテアーゼに分解されやすいが、変性過程において、N'構造へ移行する。N'構造はプロテアーゼに耐性で、この構造が非常に遅く変性することが明らかとなった。また、N'構造の重要な部位として、C末端の領域であることも同定し、この領域がプロテアーゼ耐性に関与していることが示された。
一方、Sto-RNase HIIは、このC末端部位が異なっており、Tk-RNase HIIのような2種類の天然構造を有しておらず、通常の2状態変性をすることがわかった。
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