| 研究概要 |
1.ゲノム情報の解析
AMP再利用経路を有するアーキアだけに分布している遺伝子を探索したが、特異的な分布を示す遺伝子は見出せなかった。一方、翻訳因子と推定されているsua5遺伝子が1部のメタン菌においてRubiscoやAMP phosphorylaseとオペロンを形成していることを見出した。これらのことからsua5とAMP再利用経路の機能が関連している可能性も考えられる。今後sua5とAMP再利用経路の関連性を検討する。
2.異なる培地条件でのトランスクリプトーム解析
AMP再利用経路が活性化される生育条件を探索した。培地に各基質を添加し、AMP再利用経路を構成するAMP phosphorylase,ribose-1,5-bisphosphate isomerase(R15Pi)およびRubiscoの発現量をWestern blotにより調べた。その結果、AMPでは活性化されなかったもののアデノシンを添加した培地においてR15PiおよびRubiscoの発現量が有意に増加した。このことからアデノシンをリン酸化しAMPへ変換する酵素や代謝経路が存在する可能性が考えられた。現在、アデノシンキナーゼの可能性があるribokinase familyに属するタンパク質を解析している。
3.AMP再利用経路構成遺伝子の破壊株および高発現株の作製・解析
RubiscoおよびAMP phosphorylase遺伝子の破壊株、ΔrbcおよびΔdeoA株を作製した。また、R15Pi遺伝子破壊株を作製中である。ヌクレオシド添加培地において宿主の増殖量が上昇したのに対し、ΔrbcおよびΔdeoA株においては宿主ほどの増殖上昇は見られなかった。本代謝経路がアデノシンを中心とするヌクレオシド資化・変換で機能している可能性も考慮に入れて研究を進める。
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