血清糖タンパク質・ペプチド解析による原発性肝細胞癌のマーカー探索・同定・臨床応用

2010 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 22790521
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 曽川 一幸 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (50436440)
• キーワード: 原発性肝細胞癌 / レクチンビーズ / MALDI-TOF MS / 二次元電気泳動 / N型糖タンパク質 / N型糖ペプチド / 血清 / プロテオーム解析

研究概要

わが国の年間の原発性肝細胞癌による死亡者数は3万人を超え早期診断体系において、現在利用されている腫瘍マーカー(AFP, AFP-L3, PIVKA-II)はその診断効率において超音波検査などの画像診断に及ばないのが現状であり、新たなマーカーの探索が急務である。今年度の研究計画として原発性肝細胞癌の新規腫瘍マーカー候補N型糖タンパク質・ペプチドを探索し・同定を目的としている。
(1)血清の糖ペプチド解析:原発性肝細胞癌患者術前後血清20組(計40検体)を使用し、MB-LAC ConA, MB-LAC LCA (Bruker Daltonics社)を使用し、N型糖ペプチドを抽出後、逆相HPLCにより30フラクション分画した。各フラクションをMALDI-TOF MSで測定し、発現解析を行った。術前後に12ピーク統計学的有意差(p<0.05)が認められた。各マーカー候補ペプチドの同定を進めている。
(2)血清中のN型糖タンパク質解析:原発性肝細胞癌患者術前後血清20組(計40検体)を使用し、血清中のメジャータンパク質12種類を除去し、MB-LACConA, MB-LAC LCA (Bruker Daltonics社)を使用し、N型糖タンパク質を抽出後、逆相HPLCで分画した各フラクションを二次元電気泳動で解析した。術前後に42スポット統計学的有意差(p<0.05)が認められた。各マーカー候補タンパク質同定を進めている。

研究成果

• [雑誌論文] Increased serum levels of pigment epithelium-derived factor by excessivealcohol consumption -Detection and identification by a three-step serumproteome analysis- (2011)
  • 著者名/発表者名: Sogawa K, Kodera Y, Satoh M, Kawashima Y, Umemura H, Maruyama K, Takizawa H, Yokosuka O, Nomura F.
  • 雑誌名: Alcoholism Clinical and Experimental Research 巻: 35 ページ: 211-217
  • 査読あり
• [学会発表] Measurement of 5.9 kDa fragment of fibrinogen alpha-C chain (FIC 5.9) by MALDI-TOF MS with stable-isotope labeled standard in patients with liver diseases. (2010)
  • 著者名/発表者名: Sogawa K, Kodera Y, Noda K, Umemura H, Matsushita K, Kojima R, Katayama K, Nomura F.
  • 学会等名: HUPO 9th Annual World Congress
  • 発表場所: Sydney, Australia
  • 年月日: 2010-09-20
• [学会発表] 消化器領域における多戦略的疾患プロテオミクス (2010)
  • 著者名/発表者名: 曽川一幸、高野重紹、清宮正徳、佐藤守、小寺義男、野村文夫
  • 学会等名: 第57回日本臨床検査医学会学術集会
  • 発表場所: 東京(京王プラザホテル)
  • 年月日: 2010-09-10
• [備考]
  • URL: http://www.m.chiba-u.ac.jp/class/moldiag/clinical_proteomics_index.html