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本年度はWGEF遺伝子のコンディショナルノックアウトマウスを作出するため、相同組み替えを起こしたWGEF(flox-neo/+)ES細胞(C57BL/6純系由来)をマウス胚盤胞に顕微注入し、キメラマウスを作製した。比較的キメラ率の高いキメラマウスが2頭誕生し、それぞれをC57BL/6マウスと掛け合わせることにより、キメラマウスの子を得た。ES細胞由来のマウスはコートカラーがC57BL/6由来となる黒となるため、これらの子マウスのうち、黒いコートカラーを持つマウスからゲノムDNAを抽出し、neomycin耐性遺伝子カセット内のプライマーまたは、neomycin耐性遺伝子カセットとWGEF遺伝子のプライマーの両方でゲノムPCRを行い、WGEF;flox-neoアリルを検出した。PCR条件は、キメラマウスから抽出したゲノムDNAを用いて、WGEF ; flox-neoアリルを検出するPCRを行い、特異性の高いPCR条件を設定した。2頭のキメラマウスの子それぞれ約20頭のゲノムを使用してPCRを行ったところ、設定した条件において、WGEF ; flox-neoアリルは検出できなかった。今後はスクリーニングするキメラマウスの子を増やすとともに、キメラマウスの再作成を行い、生殖系列に移行したノックアウトマウスを得る。
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