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本研究の目的は、抽出した膜結合型マトリクスメタロプロテアーゼ-1(membrane type 1 matrix metalloproteinase ; MT1-MMP)基質ペプチド配列を母核として、RIシグナルドメイン、細胞膜捕定ドメイン、阻害ドメインとを組み合わせることで、がんにおけるMT1-MMP活性依存的に病変局所に捕捉・濃縮される『MT1-MMP依存性捕捉型プローブ(MT1-MMP dependent anchoring probe ; MDAP)』を開発することにある。そこで本年度は、ファージディスプレイ法によるMT1-MMP基質ペプチド探索、MDAPの合成検討、インビトロ評価系の樹立、について検討を行った。
1)ファージディスプレイ法によるMT1-MMP基質ペプチド配列の抽出と評価
ランダムDNAを作製し、ファージのキャプシドタンパク質コード領域に遺伝子を挿入した。大腸菌に感染させた後、ファージライブラリの固相ビーズを用いたバイオパニングを繰り返すことにより、MT1-MMPに親和性を有するペプチドを発現することが期待されるファージの濃縮を確認した。
2)MDAPの合成検討
機能を保持する膜捕定ドメイン鎖長の検討が必要なことから、鎖長の異なるいくつかのプローブ骨格を設計し、固相・液相合成法を適宜使い分けることで合成を行った。
3)インビトロ評価系の樹立
MTI-MMPは培養条件によって発現が大きく変動する。ウエスタンブロット、フローサイトメトリーを用いた検討により、MT1-MMP発現量の異なる数種の有効な細胞種を見出した。
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