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申請者はDMD患者に筋萎縮や筋力低下をもたらす因子やmdxマウスの筋再生を促進する因子を同定するために、mdxマウスと正常マウス骨格筋由来の細胞株を作成し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、機能不明のRAMP (regeneration-associated muscle protease)、および細胞周期進行抑制能を有すると報告されているBrinp 3を同定した。RAMPは720アミノ酸からなる分泌タンパク質である。RAMP mRNAの発現解析により、骨格筋の再生過程にRAMPが関与する可能性が示唆されている。Brinp3は神経分化過程で特異的に発現誘導されることが報告されているが、その機能は明らかになっていない。マウス筋芽細胞株C2C12への筋分化誘導によりBrinp3 mRNAの発現が亢進することが分かった。C2C12にBrinp3 siRNA導入したところ、筋分化が抑制されることが分かった。これらの結果は、Brinp3が骨格筋再生過程に関与することを示している。本研究では、RAMPおよびBrinp3が筋再生過程にどのように関与しているのか、その実態を明らかにすることを目的とする。
本年度はRAMPコンディショナルノックアウトマウスの作成に着手した。既に、骨格筋特異的にCreリコンビナーゼを発現するMCK-Creマウスの導入が済んだ。今後、RAMPコンディショナルノックアウトマウスを作成し、骨格筋におけるRAMPの機能を明らかにする予定である。また、RAMPは細胞外基質に存在し、他の分子の安定性に関与する可能性が得られた。今後詳細に検討する予定である。Brinp3については、yeast two hybrid assayにより結合分子の同定を行い、7つの候補を得ることができた。これらの候補分子がBrinp3と結合するのか、免疫沈降実験により検討している。
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