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I 各種膀胱癌細胞株におけるsurvivinの発現の確認、抗癌剤耐性株の作製とsurvivin発現増強の検証(1)膀胱癌だけでなく各種泌尿器癌細胞株(T-24、)からRT-PCRでmRNA、western blotでタンパク発現を確認した。どの細胞株でもsurvivinの発現を認めた。しかしその発現強度においては有意差を認めなかった。(2)T-24を用いて低濃度の抗癌剤(cisplatin、Paclitaxel)存在下で培養しそれぞれの抗癌剤耐性T-24(T-24-CDDPR、T-24-PTXR)を作製した。抗癌剤耐性能をMTT assayで確認し、薬剤耐性であることを確認した。survivinのmRNA、タンパク発現レベルを確認したが、耐性獲得前の細胞株の発現レベルと有意差はなく、survivinによらない耐性獲得が類推された。
この耐性株は最近樹立されたものであり、今後詳細に検討を加える予定である。
II survivin遺伝子導入による膀胱癌細胞株の抗癌剤耐性化についての検討
(1)survivin発現アデノウィルスベクターの作製をおこなった。これをT-24に遺伝子導入を行ったが、十分なウィルス濃度が得られず、survivinの導入効率が悪く(発現の増強葉は認める。)抗癌剤の耐性の獲得にまで至っていない。現在ウィルス濃度をあげるべく調整中である。
III アデノウィルスベクターによるDCへのsurvivin遺伝子の導入と発現についての検討を行った。
遺伝子導入によりsurvivinの発現をRT-PCR、western blotで確認した。至適導入MOIを100とした。
IV survivin遺伝子導入でDCの生存期間、生存率の延長が得られるかについての検討
survivin遺伝子導入DCの生存率の改善をtrypan blue stainingで確認した。今後Annexin V、TUNEL染色で再確認の予定。
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