研究課題
本研究では、PCR法にて高感度で定量可能な「外来DNAを封入したノロウイルスの外套タンパク粒子（VLPs）」を、あらかじめ作製したVLPsを還元剤の添加によりいったん崩壊させた後、外来DNA共存下での塩化カルシウムの添加によりVLPsを再合成させることにより外来DNAをVLPsに封入し、作製しようと試みてきた。しかしながら、昨年度での検討では外来DNAの封入率が著しく低く、このようなDNA封入VLPsを用いても、計画当初の目標であった「低濃度ノロウイルスの浄水処理性の評価」が困難であると判断された。そこで本年度は、既にVLPsへ封入が高い率にて成功している金ナノ粒子に、あらかじめ外来DNAを修飾し、金ナノ粒子とともにVLPsへ封入する手法を試みた。しかしながら、電子顕微鏡の観察では、明確な封入が確認されなかった。これに対し、カルボキシ-EG6-ウンデカンチオールを用いたコーティング処理を金ナノ粒子に施すと、DNA修飾をしていない金ナノ粒子の封入率が大幅に向上することが分かった。今後、コーティング処理を施したDNA金ナノ粒子複合体を用いて、VLPsへの外来DN A封入を試みる予定である。一方、浄水処理方式を、通常の浄水処理で行われる凝集－沈澱－砂ろ過処理から、凝集－MF膜処理へと変更した、札幌近郊の2つの浄水場にて、トウガラシ微斑ウイルス（PMMoV）の浄水処理工程における除去率をそれぞれ複数回調査し、変更前の除去率と比較したところ、A浄水場では、通常処理で1.5～3.3 log、膜処理では2.2.～2.9 logであり、B浄水場では、通常処理で3.2～4.7 log、膜処理では2.8～4.4 logであった。すなわち、凝集－MF膜処理でのPMMoVの除去率は、凝集－沈澱－砂ろ過処理での除去率と概ね同程度であることが分かった。
2: おおむね順調に進展している
本年度の検討にて、金ナノ粒子に外来DNAを複数本修飾することができることを確認した（5～11 copies/VLPs）。従って、これをVLPsに封入することにより、1つのVLPsに複数のDNAが封入可能であり、VLPsのPCRによる定量感度を大きく向上できる可能性が示され、次年度へ繋がる成果を出すことができた。また、「浄水場でのPMMoV調査」についても継続してデータを蓄積しており、処理方法を「凝集－沈澱－砂ろ過処理」から「凝集－MF膜処理」へと更新した2つの浄水場でのデータを取ることができた。これにより、同一の水系にて処理法の違いがウイルス除去率に与える影響を議論することができる。以上より、「おおむね順調に進展している」と判断した。
DNA封入VLPsの作製に関しては、DNAを修飾した金ナノ粒子にコーティング処理を施すことにより（既にDNAを修飾していない金ナノ粒子のコーティングにより、VLPsへの封入率が向上することを実験的に確認している）、DNAの封入率を大幅に高め、室内浄水処理実験を行いたい。一方、実浄水場におけるPMMoVの処理性調査に関しては、季節変動や経年変化を調べるため、近郊浄水場での調査を継続するとともに、他地域の浄水場における調査も継続して行いたいと考えている。また、PMMoV以外に、水系ヒト感染性ウイルスについても知見の集積を試みたい。
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Water Research
巻: 213 ページ: 118160
10.1016/j.watres.2022.118160
