| 研究実績の概要 |
口白症感染魚に特異的に発現する３つのRNA分節（Kuchijirosho-Associated RNA：KAR）について，1）KARのリコンビナントタンパク質の作製，および2）KARを利用したDNAワクチンの開発に関する研究を行った。具体的には以下のとおりである。
1）各KAR- A,-B ,-CのcDNA断片をN末端にHisタグを付与する発現ベクターpET-22b(+)へ組み込み，4種類の大腸菌Escherichia coli株（BL21 DE3, BL21 DE3 pLysS, Rosetta gamiB, Rosetta gamiB DE3 pLysS）に導入し，リコンビナントタンパク質を合成した。その結果，発現プラスミドに導入されたKARsに由来するタンパク質（分子量：約50 kDa）が発現し，KAR-A,-B, -C の発現量にはE. coli 株による差異が確認された。また，ウエスタンブロッティングにより，抗Hisタグ抗体との抗原抗体反応が確認されたため，得られたタンパク質はKARに由来すると考えられた。今後は，このリコンビナントタンパク質をウサギに免疫して抗体を得る。
2）KAR- A,-B ,-Cをそれぞれ組込んだ真核細胞発現プラスミドベクターをフグに筋肉注射後，DNAワクチンとしての効果を検証した。その結果，KAR-Aプラスミド区において，攻撃試験における死亡率が有意に低く，かつ生残魚の口白症の症状が他の試験区と比べて軽微であったが，全ての試験区の生残魚の脳からKARが検出され、その発現量は各区間で有意差がなかった。これらの結果から，KAR-Aプラスミドを接種したトラフグでは，口白症の重篤化を予防する効果が誘導されたと推察された。今後は，接種原をKAR-Aプラスミドに絞り，そのワクチン効果を詳細に検証する。
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