| 研究課題/領域番号 |
22K06124
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
近藤 裕史 名古屋大学, 医学系研究科, 助教 (50644655)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 血管内皮細胞 / モノクローナル抗体 / 毛細血管 / 周囲細胞 / 傍血管マクロファージ |
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| 研究実績の概要 |
本申請課題では細胞外O結合型Nアセチルグルコサミン（O-GlcNAc）糖鎖の付加酵素であるEogtの発現細胞の同定と、その細胞における意味付けである。初めに、Eogt発現細胞を同定するために様々な抗Eogt抗体を用い、マウス組織を対象に免疫組織染色を行った。その観察には高解像度共焦点レーザー顕微鏡を利用した。その結果、同一臓器内においても機能的に異なる領域に存在する血管が特異的に染色された。このことはひとえに血管といっても、糖鎖の観点から異なるサブセットが存在することを強く示唆するものである。さらに、様々な分子マーカーで染色したところ、Eogtを発現する血管の特徴化を明らかにすることができた。その血管は他の血管と比べてユニークであり、それがEogt発現たらしめる原理となる可能性が考えられた。そこでその血管に特徴的な外的刺激を培養血管内皮細胞に与えると、予想通り、Eogtの遺伝子発現の増加が認められ、その外的刺激に応答するEogt発現調節エレメントも同定することに成功した。そのユニークな血管特異的に赤色蛍光レポータータンパク質を発現させつつ、Eogtを欠失させるマウスを作製するため、LSL-tdTomato (Ai9)マウス、floxed Eogtマウス、ユニーク細胞特異的Creトランスジェニックマウスを交配させて目的のマウスを得た。現在、そのユニーク血管におけるEogtの機能を調べるため、病態発症マウスとの更なる交配を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
組織染色に使える抗Eogt抗体を割とすぐに見つけることができたため、予定より早くにEogt発現細胞のプロファイリングが可能になった。また、Eogtを発現誘導する外的要因についても、仮説通りとなり、順調に研究は進んでいるといえる。
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| 今後の研究の推進方策 |
上述した通り、高解像度共焦点レーザー顕微鏡にてペリサイトではなく、ユニークな血管内皮細胞においてEogtの特異的な発現を見出したことにより、本申請課題の目的１は達成された。ユニークな血管内皮細胞サブセットにおけるEogtの機能を、組織特異的誘導型conditional Eogt-KOマウスを解析することで明らかとする。当該マウスはすでに樹立済みであり、LSL-tdTomatoレポーターマウスとの交配によりEogtの発現とtdTomatoの発現細胞が一致することを確認できている。引き続き、その血管に着目したチャレンジ実験により、Eogtのその細胞特異的な機能を明らかとする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
初年度に民間からの助成金をいただいたため、基盤C交付金に次年度使用額が生じた。
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