| 研究課題/領域番号 |
22K06176
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| 研究機関 | 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構 |
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研究代表者 |
角南 智子 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構, 量子生命科学研究所, 主幹研究員 (50554648)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 分子夾雑環境 / 光ピンセット / ヌクレオソーム |
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| 研究実績の概要 |
ヌクレオソームは真核生物のクロマチンの基本的な構成要素であり、約150bpのDNAとヒストンタンパク質から構成されるDNAタンパク質複合体である。ヌクレオソームDNAのアンラッピングは、遺伝情報読み出しに重要な役割を果たしている。近年、細胞内は、種々の分子が混み合った環境(分子夾雑環境)であり、DNAやタンパク質が希釈状態とは異なる構造・異なる相互作用を持っている可能性が指摘されている。本研究課題では、ヌクレオソームDNAのほどけやすさが分子夾雑環境によってどのように制御されるのかに注目して研究を行ってきている。本年度の研究実績は以下の通りである。
(1)FRET法によるヌクレオソームのほどけやすさの解析: 23年度は、22年度に行った蛍光物質を付与したモノヌクレオソームの実験を発展させ、モノヌクレオソームに、分子夾雑環境を模すための薬剤としてPEG400を加えて時間相関単一光計数法によるFRET測定を行った。結果、PEG400下では、塩を加えても、DNAがほどけづらくなっていることを見出した。
(2)光ピンセット法によるヌクレオソームのほどける過程の解析: 23年度は、22年度に作成した約8.5kbpのDNA上にヌクレオソームが12個並んだものを用いて、PEG400存在下で光ピンセット実験を行った。その結果、PEG400の存在下では、ヌクレオソームDNAのアンラッピングに必要な力が増大することを見出した。
(1)(2)の結果はよく似ており、PEG400の存在下では、ヌクレオソームDNAがヒストンに巻きついた構造が安定化していることを示している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ほぼ、計画通りに研究が進んでいる。しかしながら、光ピンセット実験用のヌクレオソーム再構成実験の成功率が低かったため、来年度、より多くのDNA試料を使って、試料調製を行う予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年度、本年度に作成した実験系を用いて、PEG400以外の様々な分子夾雑薬剤(他の分子量のPEGやデキストランなど)を用いて実験を行う。実験データを取りまとめて、論文投稿を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
試料調製のトラブルシュートのために小スケールの実験を繰り返したため、試薬の購入量が少なかった。また、次年度に、論文執筆に必要な経費(投稿料など)を持ち越した。これらの費用は次年度により多くの試料を調製して実験を進め、論文を執筆することで使用する。
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