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2023 年度 実施状況報告書

新規卵巣ペプチドCiDR1による卵胞成長制御機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 22K06307
研究機関公益財団法人サントリー生命科学財団

研究代表者

松原 伸  公益財団法人サントリー生命科学財団, 生物有機科学研究所・統合生体分子機能研究部, 研究員 (70710747)

研究期間 (年度) 2022-04-01 – 2025-03-31
キーワードカタユウレイボヤ / 卵巣ペプチド
研究実績の概要

本研究では、カタユウレイボヤの卵巣から新規に同定したペプチドホルモンCiDR1について、卵胞成長における機能を明らかにする事を目的としている。
2023年度は研究計画に従い、予測精度を向上させた予測器を用いてCiDR1の受容体を予測し、一つの候補遺伝子を得た。また、CiDR1に対する特異的な抗体を作製し、その抗CiDR1抗体を用いた免疫染色の結果から、Stage II卵胞のテスト細胞特異的に発現することを明らかにした。この結果はin situ hybridizationによる局在解析の結果と一致していた。また、免疫電顕解析の結果から、Stage II卵胞のテスト細胞のシグナルは分泌顆粒内に見られ、CiDR1が分泌されてパラクラインもしくはオートクラインに作用することが強く示唆された。In vivo機能解析については、計画通りCiDR1に特異的なCRISPR RNAを設計し、導入した幼生個体を用いた配列解析によって高効率でCiDR1に変異を導入できることがわかった。そのCRISPR RNAをマイクロインジェクションした卵を用いてゲノム編集体を作製し、変異が導入されたF1およびF2世代の個体を得た。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

2023年度は計画通り、予測精度向上させた予測器を用いて受容体遺伝子の再予測を行った。また、CiDR1に特異的な抗体を作製して免疫染色を行い、in situ hybridizationの卵巣内局在を再現できただけではなく、免疫電顕解析によって分泌顆粒における局在を同定できた。さらに計画に先行してゲノム編集体の作製も順調に進行しているため、(2)のおおむね順調に進展している、の評価とした。

今後の研究の推進方策

2024年度はまず、CiDR1のゲノム編集体のヘテロ変異体同士を掛け合わせてホモ変異体を作製し、その表現型解析を行う。具体的には、CiDR1の発現が上昇する幼生期以降の幼若体期―微小成体期における各器官の形成における異常を調査する。成体まで異状なく成長が進行する場合は卵巣形成(卵巣サイズ、卵の成長段階、数など)に着目して表現型解析を行う。遺伝子欠損解析で期待した結果が得られない場合に備えて、CiDR1の強制発現体の作製にも着手する。具体的には、ホヤの全身の組織に発現する遺伝子プロモーターの下流にCiDR1のORFつないだ導入遺伝子を設計する。トランスポゼースとともにマイクロインジェクションを行い、強制発現体を作製する。蛍光標識を用いた個体識別と、幼若体期を用いたCiDR1発現の上昇などを確認し、ゲノム編集体と同様の表現型解析を行うことでCiDR1の機能解明を目指す。

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2024 2023

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (1件)

  • [雑誌論文] A Novel Hemocyte-Derived Peptide and Its Possible Roles in Immune Response of Ciona intestinalis Type A2024

    • 著者名/発表者名
      Matsubara Shin、Iguchi Rin、Ogasawara Michio、Nakamura Hiroya、Kataoka Tatsuki R.、Shiraishi Akira、Osugi Tomohiro、Kawada Tsuyoshi、Satake Honoo
    • 雑誌名

      International Journal of Molecular Sciences

      巻: 25 ページ: 1979~1979

    • DOI

      10.3390/ijms25041979

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] ホヤの組織特異的遺伝子の同定と進化的洞察2023

    • 著者名/発表者名
      松原 伸、大杉 知裕、白石 慧、和田 明澄、佐竹 炎
    • 学会等名
      日本動物学会 第94回山形大会

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公開日: 2024-12-25  

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