| 研究課題/領域番号 |
22K07146
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
石村 昭彦 金沢大学, がん進展制御研究所, 助教 (80375261)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | eエピジェネティクス / 薬剤耐性 / EGF受容体変異肺がん細胞 / オシメルチニブ |
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| 研究実績の概要 |
全肺がんの大半を占める非小細胞肺がんでは、（特にアジア人において）上皮成長因子受容体（EGFR）に高頻度な遺伝子変異が観察される。そして変異によって誘導される慢性的なEGFRシグナルの活性化が、腫瘍細胞の増殖や生存に重要であると考えられている。このようなEGFR変異肺がん患者に対しては、EGFR特異的なチロシンキナーゼ阻害剤（EGFR-TKI）のひとつ、オシメルチニブによる分子標的薬治療が有効である。ところが、治療開始から1～数年以内に耐性がんとして必ず再発するのが大きな課題である。
研究代表者は、この耐性獲得メカニズムにエピジェネティック制御因子が重要であると考え、目的特化型CRISPR/Cas9スクリーニングによって候補遺伝子の同定を試みた。一方、マイクロアレイ解析によってオシメルチニブ初期応答に関わるエピジェネティック制御因子のスクリーニングを行った。その結果、研究代表者はヒストンアセチル化酵素Xと、その結合タンパク質Yを新規の薬剤耐性に関わる候補因子として同定することに成功した。次にEGFR変異肺がん細胞株を用いたノックダウン実験を行った。その結果、どちらの遺伝子の発現抑制させても薬剤耐性能が有意に上昇することが観察され、また結合タンパク質Yはオシメルチニブ処理後数時間以内に誘導していた。従って、注目しているヒストンアセチル化酵素複合体は、オシメルチニブ初期応答因子として薬効に対して重要な役目を担っている可能性が示唆された。研究代表者は、このヒストンアセチル化酵素複合体が制御する標的遺伝子候補を複数見出しており、今後、分子レベルでオシメルチニブ耐性獲得における分子基盤の一端を明らかにすると同時に、新たな「耐性克服」あるいは「耐性回避」戦略の確立を目指す。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
EGFR特異的なチロシンキナーゼ阻害剤のひとつ、オシメルチニブは、対象患者に対して劇的な治療効果を得ることができるが、数年以内に「薬剤耐性がん」として必ず再発するのが大きな課題である。私たちは、この耐性獲得メカニズムにエピジェネティック制御因子が重要であると考え、標的をエピジェネティック制御因子（120種類のヒストン・DNA修飾関連酵素および共役因子）に絞った「目的特化型CRISPR/Cas9スクリーニング」を試みた。その結果、ヒストンアセチル化酵素HBO1の同定に成功した。HBO1特異的shRNAを用いてノックダウン実験を行った結果、EGFR変異肺がん細胞HCC827の薬剤耐性能が著しく上昇した。一方、マイクロアレイ解析によってオシメルチニブ処理後に誘導するエピジェネティック制御因子のスクリーニングを行った結果、HBO1結合タンパク質ING4を含む複数の候補遺伝子の同定に成功した。ING4ノックダウン実験の結果、HBO1ノックダウン実験結果と同様に薬剤抵抗コロニーの出現が有意に上昇した。ING4は、ヒストンH3のメチル化修飾リジン残基（H3K4me3）に結合する「エピジェネティックReaderタンパク質」のひとつとして知られているが、研究代表者は、HBO1-ING4複合体がオシメルチニブの奏効性に極めて重要な役割を担っていると考え、ING4ノックダウン細胞を用いたマイクロアレイ解析を行った。その結果、ING4の標的遺伝子候補を複数同定することに成功し、オシメルチニブ処理後、HBO1-ING4複合体の分子基盤の一端が明らかになりつつある。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの研究成果より、HBO1-ING4複合体が肺がん細胞のオシメルチニブ感受性を制御し、その破綻が薬剤耐性獲得に関わる可能性が強く示唆されている。また2023年度に行ったマイクロアレイ解析の結果、ING4ノックダウンで有意に発現が低下する候補遺伝子を複数同定することに成功し、そのうち幾つかは定量PCR法によって実際の発現低下を確認済みである。今後、クロマチン免疫沈降法によって、これら候補遺伝子がING4（およびHBO1）の直接的な発現制御を受けるかどうかを検証していく。また、マイクロアレイ解析によってオシメルチニブ処理後に誘導するエピジェネティック制御因子のスクリーニングを行った結果、ING4以外の複数のエピジェネティック制御因子の同定に成功した。そのうち因子ＡはING4と同様にオシメルチニブ処理後に著しい発現増加が観察され、さらに因子Ａに対する分子標的薬はオシメルチニブとの強い併用効果が認められた。今後、研究代表者は、これまでのプロジェクトと平行して因子Ａとオシメルチニブ間の分子的関連性を明らかにしていく。
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