研究課題/領域番号 |
22K07161
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研究機関 | 公益財団法人がん研究会 |
研究代表者 |
中太 智義 公益財団法人がん研究会, がん研究所 がんエピゲノムプロジェクト, 研究員 (10364770)
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研究分担者 |
丸山 玲緒 公益財団法人がん研究会, がん研究所 がんエピゲノムプロジェクト, プロジェクトリーダー (60607985)
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研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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キーワード | 乳がん / 変異体 / scRNA-seq解析 / scATAC-seq解析 / レンチウイルスベクター / 転移 / 再発 / 新規シングルセルATAC-seq |
研究実績の概要 |
本研究は、転移性乳がんで生じる多様な変異体タンパク質の機能異常性を網羅的に解析するための実験系を構築し、その病的意義を明らかにすることを目的とする。そのために、シングルセル解析とバーコード技術を組み合わせて、変異体の機能的解析を実施する計画である。今年度は昨年度に引き続き、変異体のベクターの種類を特定できるサンプルバーコードを、各種シングルセル解析で検出できるようなレンチウイルスベクターの構築を行なった。配列上の問題があり、試行錯誤を必要としたが、最終的にはscRNA-seq解析(10x Genomics社のChromium)とscATAC-seq解析(BioRad社のddSEQ)の両方で読み取ることができるベクターの構築に成功した。ただ、シングルセル解析だけではリード数が足りず、細胞とサンプルバーコードの紐付けが困難なことがあり、その際に情報を追加で取得する目的で、ライブラリ自体をPCRで増幅しシークエンスするためのプロトコールの開発・調整を行なった。また、本研究を推進する上では、どの細胞株を用いて検証するかに加えて、レポーターベクターとしてどの標的遺伝子を選定するかも非常に重要である。そのため、研究室内外の各種データを再解析することにより、ERの標的遺伝子の患者間での多様性を再評価し、どの遺伝子をレポーターとして用いるかについての検討を実施した。予備検討的な実験を行い、最適な細胞株とレポーター遺伝子の組み合わせの候補を検討している。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
理由:試行錯誤を要したが、シングルセル解析を応用した機能的スクリーニングの実験系の構築に成功し、概ね計画通りに進んでいると考えている。
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今後の研究の推進方策 |
これまでに構築してきたシステムを用いて、ER変異体の機能的スクリーニングを実施する。いくつかの条件下で実験を行い、機能異常性を有する変異体の候補を同定し、さらなる機能解析に展開する。
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次年度使用額が生じた理由 |
今年度は研究室内で既に購入済みの試薬や消耗品の活用ができたことから、予定使用額が下回った。
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