| 研究課題/領域番号 |
22K07185
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| 研究機関 | 富山大学 |
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研究代表者 |
三輪 武史 富山大学, 学術研究部医学系, 助教 (90775800)
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| 研究分担者 |
奥村 知之 富山大学, 学術研究部医学系, 講師 (10533523)
藤井 拓人 富山大学, 学術研究部薬学・和漢系, 助教 (50567980)
藤井 努 富山大学, 学術研究部医学系, 教授 (60566967)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | CTC / α3NaK / 胃癌 / 膵癌 / マウスモデル |
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| 研究実績の概要 |
これまで大腸癌、肝細胞癌、胃癌細胞株を用いた細胞株レベルでのα3NaKの発現と、アノイキス回避におけるα3NaKの機能について検証してきた。
癌細胞の遊離（Detach）操作の際のα3NaKの原形質膜への移行が重要な役割を果たしていると考え、まずは膵癌細胞株の通常のAttach状態とDetach状態を再現し、そのα3NaKの発現を確認した。細胞表面ビオチン化を行い、膵癌細胞株であるPanc1とMIAPaca2を使用して原形質膜のα3NaK発現を比較し、Attach状態ではPanc1とMIAPaca2どちらも、α3NaKの発現認めず、Detach状態ではα3NaKが細胞表面の原形質膜へ移動していることが確認できた。さらに免疫染色でのα3NaKの局在変化について確認した。MIAPaca2を使用してα3NaKを蛍光抗体で染色したところ、Attach状態の膵癌細胞株では主に、細胞質内、核の周囲にα3NaKは分布しており、Detach状態にした細胞では原形質膜（細胞表面）にドット状に分布を認めた。
マウスCTCモデル作成においては、ヌードマウスにMIAPaca2を使用して皮下腫瘍を作成し、6～8週間後に心臓採血を行うモデルを作成した。マウス血を溶血処理し、抗マウスCD45抗体を用いてマウス細胞をネガティブセレクションすることでCTCを濃縮モデルを確立。腫瘍生着率75%、CTC採取率43%の精度でCTCを回収し得た。マウスモデルより回収したCTCに対して、α3NaKの発現を確認し、蛍光抗体法にて原形質膜にドット状に分布することを確認、Detach状態として矛盾ない結果を確認した。今後、強心配糖体作用下でのα3NaK発現について検証する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CTCマウスモデルでのCTC確認は許容できる精度で作成できている。強心配糖体作用下でのチャネル局在変化について検証を始めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
強心配糖体によるα3NaK分布の変化を検証し、CTCの遊離接着おける作用を検証する。これにより、癌細胞が生存したまま循環する機序の解明につなげる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
消耗品について予定より使用量が少なかったものの、次年度以降で使用が見込まれます。
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