| 研究課題/領域番号 |
22K07480
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
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| 研究分担者 |
岡 孝和 国際医療福祉大学, 医学部, 主任教授 (60291514)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | long COVID / PVFS / fatigue / animal model / neuroinflammation / mouse |
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| 研究実績の概要 |
本研究ではポストウイルス疲労症候群(long COVID)の動物モデルを明らかにすることを目的とし、３年間で野生型マウスでの生理学的の実験と組織学的検証を行う予定である。以下に、これまでの進捗状況の概要を記す。
（１）倫理委員会での承認：本研究を本学で行うため、動物実験計画書を作成し、動物倫理委員会の承認を取得した。この承認により、プロジェクト全体で倫理指針、動物福祉、および研究の誠実さに従っていることが確保される。
（２）実験室の設立と備品の調達：実験手順を実施するための必要な施設と資源を備えた実験室を確保した。この過程で、実験に必要な機器、道具、および材料を特定、調達し、実験室内に設置した。実験室には、実験に必要な用品や消耗品を揃え、研究活動を円滑に行えるよう準備した。
（３）パイロットスタディの完了と初期の調査結果：実験手順の実現可能性を評価し、潜在的な課題を特定するために、いくつかのパイロットスタディを実施し、それに必要な手技に習熟した。炎症（サイトカインストーム）を誘発するためのTLR3アゴニスト（Poly I:C）の最適な投与量を決定するために、異なる投与量のPoly I:Cとそのビークルを注射しました。具体的には、マウスを用いて体温と活動量を測定するためのデータロガー埋め込み手術、シックネス行動を生じるpolyI:C（腹腔内注射）の用量設定、poly I:C腹腔内投与後のアロディニア、筋力の変化を調べるための、フォンフレイテスト、ハンドグリップテストなどの手技に習熟した。今後、これらのパイロットスタディをもとに、実験計画書にそった実験を行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現在、私の研究は、提案した計画に沿って順調に進んでいます。簡単にまとめると、SARS-CoV-2感染後の慢性疲労、ブレインフォグ、痛みなどのウイルス後疲労症候群（PVFS）症状は、ロングCOVIDと呼ばれています。この症状の根底にある病態生理学的メカニズムが不明であるため、有効な治療法は存在しない。したがって、ウイルス感染後の慢性的なストレスが、ロングCOVIDにおけるサイトカインストーム誘発性の病気反応を長引かせるか、悪化させるかを明らかにすることが不可欠である。この疑問を解決するため、今回の研究では、自由に動く動物を用いて、ポリI:C）投与後の炎症誘発性酔い反応に対する慢性ストレスの影響を評価することを目的としています。PVFSの認知機能障害や行動症状を反映させるため、実験動物としてマウス（C57BL/6J）を選択しました。このモデルを用いて、炎症（体温、運動量）および疾病行動（うつ様行動、アロディニア、疲労）の主要指標をモニタリングし、PVFSの発症に関与する受容体（Toll-Like Receptor (TLR)-3/Nucleotide-binding oligomerization domain (NLRP)-3/C-X-C chemokine receptor (CXCR)-3 inhibitors）の特定を行っています。最近、私たちはパイロット試験において、高用量のPoly I:C（200mg/kg）は不可逆的な低体温を引き起こすが、低用量のPoly I:Cは高体温を誘発し、マウスのアロディニアを増加させることを発見した。これらの知見に基づき、Poly I:Cによる炎症に起因する生理的変化と組織学的エビデンスの関連性を解析する予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後数年間は、ウイルス感染後の行動症状の悪化が、サイトカインストームによる神経炎症と関連しているかどうかを、マウスで検証する計画です。以下のステップで、このプロジェクトの行動を説明します：
（1）生理学的実験の完了 TLRアゴニスト（polyI:IC）を用いてサイトカインストームを誘発し、その後、マウスに慢性ストレスを与える。認知機能障害、うつ病様行動、アロディニアは行動学的アッセイで評価する予定です。疲労と炎症は、ワイヤレス植込み型デバイスによってモニターされる予定です。PVFSの発症における特定の受容体の役割を明らかにするため、薬物曝露の前にTLR/NLRP/CXCR阻害剤を脳室内投与（ICV）または腹腔内投与（IP）する予定です。生理実験終了後、データを分析し、プロジェクトの目的に沿って解釈し、PVFSの理解に貢献しうる相関関係や傾向を特定します。
（2）組織学的分析と分析生化学的アッセイを完了する： 組織採取後、神経炎症、神経細胞活性化パターン、炎症性サイトカインレベルを調査する予定です。これらの分析には、細胞構造を可視化し、研究課題に関連するあらゆる形態的変化を特定するためのサンプル調製、染色、顕微鏡検査が含まれます。ELISAにより、末梢性サイトカインおよびケモカインのレベルを測定する。
（3）研究成果の発表 国内・国際学会で研究成果を発表し、研究者仲間や専門家からフィードバックを受ける。
（4）研究成果の発表 科学的な厳密さと明確さにおいて最高水準にあることを確認し、査読付き学術誌に投稿するための原稿を作成します。研究コミュニティにおけるプロジェクトの成果の認知度と普及度を最大化するため、インパクトのあるジャーナルを目指します。また、プロジェクトのテーマに関連したレビューペーパーを執筆し、知識の現状を要約し、将来の研究の可能性を明らかにする予定です。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
注文した商品が今期は購入できていないものがある。ですから、残りの金額は今年度、これから行う実験のためのグッズや実験動物の購入に充てます。また、研究成果を国際学会で発表する予定です。
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