| 研究課題/領域番号 |
22K07839
|
|---|
| 研究機関 | 東北大学 |
|---|
研究代表者 |
野澤 明史 東北大学, 大学病院, 医員 (20772106)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| キーワード | ゴーハム病 |
|---|
| 研究実績の概要 |
KRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスの作製を行う。CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製する（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。これにより、Cre存在下でKRAS Q61R変異を発現するマウスが得られる。KRAS Q61R変異マウス（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）の作製に成功した後、破骨細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、タモキシフェン（TM）依存的に破骨細胞でCreを発現するマウス（Csf1r-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的に破骨細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。同様に、リンパ管内皮細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、TM依存的にリンパ管内皮細胞でCreを発現するマウス（Prox1-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的にリンパ管内皮細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。これらのマウスに、低濃度もしくは高濃度のTMを投与し、出生後に破骨細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスと、出生後にリンパ管内皮細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスを得る。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
KRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスの作製を行う。CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製する（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。これにより、Cre存在下でKRAS Q61R変異を発現するマウスが得られる。KRAS Q61R変異マウス（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）の作製に成功した後、破骨細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、タモキシフェン（TM）依存的に破骨細胞でCreを発現するマウス（Csf1r-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的に破骨細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。同様に、リンパ管内皮細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、TM依存的にリンパ管内皮細胞でCreを発現するマウス（Prox1-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的にリンパ管内皮細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。これらのマウスに、低濃度もしくは高濃度のTMを投与し、出生後に破骨細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスと、出生後にリンパ管内皮細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスを得る。
|
| 今後の研究の推進方策 |
KRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスの作製を行う。CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製する（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。これにより、Cre存在下でKRAS Q61R変異を発現するマウスが得られる。KRAS Q61R変異マウス（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）の作製に成功した後、破骨細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、タモキシフェン（TM）依存的に破骨細胞でCreを発現するマウス（Csf1r-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的に破骨細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。同様に、リンパ管内皮細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、TM依存的にリンパ管内皮細胞でCreを発現するマウス（Prox1-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的にリンパ管内皮細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。これらのマウスに、低濃度もしくは高濃度のTMを投与し、出生後に破骨細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスと、出生後にリンパ管内皮細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスを得る。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
KRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスの作製を行う。CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製する（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。これにより、Cre存在下でKRAS Q61R変異を発現するマウスが得られる。KRAS Q61R変異マウス（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）の作製に成功した後、破骨細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、タモキシフェン（TM）依存的に破骨細胞でCreを発現するマウス（Csf1r-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的に破骨細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。同様に、リンパ管内皮細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、TM依存的にリンパ管内皮細胞でCreを発現するマウス（Prox1-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的にリンパ管内皮細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。
|
