| 研究課題/領域番号 |
22K08119
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| 研究機関 | 弘前大学 |
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研究代表者 |
花田 賢二 弘前大学, 医学部附属病院, 講師 (90632993)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 肺高血圧症 / βアレスチン |
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| 研究実績の概要 |
in vitroの系においては、ヒト肺動脈平滑筋細胞を購入、培養し、研究を行った。まずはsiRNAを用いてβアレスチン1またはβアレスチン2をノックダウンした。ウエスタンブロットおよび定量的PCRにて良好なβアレスチン1、またはβアレスチン2ノックダウンを確認した。次に、エンドセリンを用いてヒト肺動脈平滑筋細胞を刺激し、extracellular-related kinase(ERK)およびAktのリン酸化を測定し、βアレスチン1またはβアレスチン2のノックダウンの効果を検討した。エンドセリン刺激によるERKのリン酸化はβアレスチン1またはβアレスチン2のノックダウンにより亢進していた一方で、Aktのリン酸化はβアレスチン2のノックダウンでのみ亢進していた。炎症性サイトカインであるTumor necrosis factor-α、Transforming Growth Factor-βの発現およびコラーゲン3a1の発現はβアレスチン2のノックダウンで亢進していたのに対し、βアレスチン1のノックダウンでは差を認めなかった。in vivoの系においては、野生型マウスに対してモノクロタリンを8週間投与することによって、肺高血圧症を誘導した。モノクロタリンの投与によって、右室肥大、およりMillarカテーテルで測定した右室圧の上昇を認めた。また組織学的には、肺小細動脈の肥厚、および動脈壁への炎症細胞の浸潤を認めた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
まずはin vitroの研究を進捗できたため。また、in vivoの研究についても開始し、組織学的な評価も含めて行うことができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、定量的PCRによって炎症マーカーや線維化マーカーの検索をさらに行うとともに、スクラッチアッセイなどで分裂、増殖能の違いを検討する予定である。in vivoの系においては、βアレスチン1、βアレスチン2ノックアウトマウスに対してモノクロタリンを投与し、野生型マウスとの比較検討を行う方針である。また免疫染色などで炎症細胞の浸潤の詳細な評価を行う予定である。
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