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2022 年度 実施状況報告書

補体関連蛋白の遺伝子変異と自己抗体の存在に着目したC3腎症の病因・病態解明

研究課題

研究課題/領域番号 22K08309
研究機関名古屋大学

研究代表者

水野 正司  名古屋大学, 医学系研究科, 特任教授 (20303638)

研究分担者 鈴木 康弘  名古屋大学, 医学系研究科, 特任講師 (20584676)
金 恒秀  名古屋大学, 医学系研究科, 特任助教 (40745238)
伊藤 恭彦  愛知医科大学, 医学部, 教授 (60402632)
福井 聡介  名古屋大学, 医学系研究科, 特任助教 (90896060)
研究期間 (年度) 2022-04-01 – 2025-03-31
キーワード実験腎炎 / 動物モデル / 補体活性化 / 補体制御
研究実績の概要

補体活性化異常の関与が注目されるC3腎症(C3G)は、発症機序などその病態に不明な点が多い。このためモデル動物の作製およびその解析が、病態の解明や治療薬の開発には不可欠である。本研究では、①補体H因子(FH)変異マウス(FHm/mMo)およびH因子/プロパジン(P)の二重遺伝子改変マウス(FHm/mPKO Mo)を用いてC3Gの多彩な病理像・発症機序の解明、②C3変換酵素(C3bBb)活性を持続させる自己抗体(C3NeF)型の新規C3Gモデルマウス作製とその病態解析を目的として研究を進めている。
概要1:表現型の異なる遺伝子(H因子(HF))変異型C3G発症マウスモデルを用いて、補体系蛋白のC3G発症・進展機序への関わりを明らかにするため、海外共同研究者から供与された。R4年は、C3Gを自然発症する遺伝子改変マウス(H因子の変異マウス(FHm/m Mo)とPもノックアウトしたHFm/mPKO Mo)を、実験可能なレベルへの安定供給状態にすること、また、供給元で認められた病変の再現性を確認した。次年度は、光顕観察下で経時的な形態学的変化、補体活性化産物の沈着、電顕観察下で高電子密度沈着物形成の時間的変化について、形態学的に解析を進める。
概要2:C3NeFの作成と病態解析のために自己抗体型C3腎症の動物モデルの作成の取り組みとして、C3NeFに相当する多クローン性抗体を作成するために、分子構造から異なる4種類のアミノ酸配列に対して、それぞれについて高純度の免疫候補ペプチドを作成した。次に、それぞれのペプチドをウサギに免疫し、ELISA系にて抗体産生を確認し、その抗血清を回収した。次年度は、および精製免疫グロブリンなどを用いて、実験動物で、腎炎惹起を試みる。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

概要1について、表現型の異なる遺伝子(H因子(HF))変異型C3G発症マウスモデルを用いて、補体系蛋白のC3G発症・進展機序への関わりを明らかにするため、海外の協同研究者よりマウスが供給されたが、供給されたマウスに汚染を確認したため、C3Gを自然発症する遺伝子改変マウス(H因子の変異マウス(FHm/m Mo)とPもノックアウトしたHFm/mPKO Mo)の除染の作業に時間がかかってしまった。
その後、遺伝子的系統維持も安定し、実験可能なレベルに安定供給ができるようになったため、供給元で認められた病変の再現性を確認できた。

概要2について、R4年度末までに、目的とする抗血清の作成まで、ほぼ計画通りに進んだ。

今後の研究の推進方策

概要1については、経時的な光学顕微鏡下に形態学的変化、補体活性化産物の沈着、電子顕微鏡(EM)観察下で高電子密度沈着物(EDD)形成の時間的変化について形態学的に解析を進める。
概要2については、次年度は、この得られた抗体のin vivo作用について、抗血清、および精製免疫グロブリンなどを用いて、ラットで、4種類の抗血清を単独、もしくは複数投与し、腎炎惹起を試みる。一旦腎炎モデルの作成に成功した後は病態解析、特に補体との関連に焦点をあてて検討を進めていく予定である。

次年度使用額が生じた理由

購入試薬について、海外からの輸送による遅延、特にプラスチック製品の欠品が多く、代替品を探す作業が多く、実験の計画に多少の影響が出たため未使用額が生じた。未使用額はモデル動物を用いて、補体系蛋白のC3G発症・進展機序への関わりを明らかにするための試薬購入に充てる。

  • 研究成果

    (9件)

すべて 2022

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (4件) (うち国際学会 4件) 産業財産権 (1件)

  • [雑誌論文] Expression of a Crry/p65 is reduced in acute lung injury induced by extracellular histones2022

    • 著者名/発表者名
      Nagano Fumihiko、Mizuno Tomohiro、Imai Masaki、Takahashi Kazuo、Tsuboi Naotake、Maruyama Shoichi、Mizuno Masashi
    • 雑誌名

      FEBS Open Bio

      巻: 12 ページ: 192~202

    • DOI

      10.1002/2211-5463.13322

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Prognostic Value of the Controlling Nutritional Status (CONUT) Score in Patients at Dialysis Initiation2022

    • 著者名/発表者名
      Takagi Kimiaki、Takahashi Hiroshi、Miura Tomomi、Yamagiwa Kasumi、Kawase Kota、Muramatsu-Maekawa Yuka、Koie Takuya、Mizuno Masashi
    • 雑誌名

      Nutrients

      巻: 14 ページ: 2317~2317

    • DOI

      10.3390/nu14112317

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Long-term peritoneal dialysate exposure modulates expression of membrane complement regulators in human peritoneal mesothelial cells.2022

    • 著者名/発表者名
      Kobayashi K, Ozeki T. Kim H, Imai M, Kojima H, Iguchi D, Fukui S, Suzuki M, Suzuki Y, Maruyama S, Ito Y, Mizuno M.
    • 雑誌名

      Front Med.

      巻: 9 ページ: 972592

    • DOI

      10.3389/fmed.2022.972592.

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Interleukin-6 blockade reduces salt-induced cardiac inflammation and fibrosis in subtotal nephrectomized mice.2022

    • 著者名/発表者名
      Tanaka H, Sun T, Kinashi H, Kamiya K, Yamaguchi M, Nobata H, Sakata F, Kim H, Mizuno M, Kunoki S, Sakai Y, Hirayama A, Soga T, Yoshikawa K, Ishimoto T, Ito Y.
    • 雑誌名

      Am J Physiol Renal Physiol.

      巻: 323 ページ: F654-F665

    • DOI

      10.1152/ajprenal.00396.2021

    • 査読あり
  • [学会発表] C1 inhibitor prevents peritoneal injuries in a rat peritonitis model.2022

    • 著者名/発表者名
      Mizuno M, Ozeki T, Iguchi D, Kojima H, Suzuki Y, Kinashi H, Maruyama S, Ito Y.
    • 学会等名
      ISPD 2022
    • 国際学会
  • [学会発表] A history of abdominal surgery does not necessary decrease the feasibility of PD: second report on a single-center observational study.2022

    • 著者名/発表者名
      Kojima H, Suzuki Y, Yoshioka T, Ishii T, Sakata F, Sato Y, Kinashi H, Katsuno T, Matsukawa Y, Ito Y, Mizuno M.
    • 学会等名
      ISPD 2022
    • 国際学会
  • [学会発表] The efficacy of HIF-PH inhibitors to treatment for renal anemia in patients with peritoneal dialysis.2022

    • 著者名/発表者名
      Koide S, Tsuboi N, Murai Y, Saka Y, Mizuno M, Ito Y.
    • 学会等名
      ISPD 2022
    • 国際学会
  • [学会発表] Modulation of the complement terminal pathway ameliorates peritoneal injuries in a rat peritoneal dialysis model.2022

    • 著者名/発表者名
      Mizuno M, Kamegai N, Hangsoo K, Morgan BP, Suzuki Y, Fukui S, Kojima H, Zelek W.
    • 学会等名
      EMCHD 2022
    • 国際学会
  • [産業財産権] アドレノメジュリン、およびその派生物による腹膜炎症の治療への応用2022

    • 発明者名
      北村和雄、水野正司、金恒秀
    • 権利者名
      東海国立大学機構
    • 産業財産権種類
      特許
    • 産業財産権番号
      WUS0002346

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公開日: 2023-12-25  

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