| 研究課題/領域番号 |
22K08539
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
神田 浩子 東京大学, 医学部附属病院, 准教授 (00345208)
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| 研究分担者 |
立石 晶子 東京大学, 保健・健康推進本部, 助教 (00897275)
大久保 ゆかり 東京医科大学, 医学部, 教授 (40233530)
土屋 遥香 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (50868560)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 乾癬性関節炎 / 掌蹠膿疱症性骨関節炎 / シングルセル解析 |
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| 研究実績の概要 |
令和4年度は、乾癬性関節炎（Psoriatic arthritis: PsA）や掌蹠膿疱症性骨関節炎（Pustulotic arthro-osteitis: PAO、欧米ではSAPHO syndrome）と診断された患者から、研究内容に関して文書説明と同意を取得した。同意が得られた患者から、治療開始前の臨床情報（年齢・性別・疾患活動性評価指標・身体機能障害評価指標・画像による構造的変化・血液検査による炎症所見など）、関節滑膜（超音波ガイド下滑膜針生検などを用いて採取）・末梢血から免疫担当細胞を収集した。細胞懸濁液に、CITE-seq抗体の添加と免疫蛍光染色を施し、フローサイトメーターを用いて生細胞を分取した（1検体あたりの目安: 10,000細胞）。10x Genomics Chromiumシステムを用いてシングルセルライブラリーを調整した。この一連の工程において、データの質の担保とコスト削減の両立を目指すため、プロトコルを改善した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
令和4年度は、1）患者リクルート・文書による説明・同意の取得、2）臨床情報・関節滑膜・末梢血の収集、3）生細胞の分取とシングルセルライブラリーの調整を目標としており、上述の如く当初の目標を達成した。生細胞の分取からシングルセルライブラリーの調整までの実験プロトコルを改善したことにより、令和4年度のコストを削減した。これにより、解析可能症例数が増加し、令和5年に実施予定の次世代シーケンスにおいて、1細胞あたりのシーケンス深度を十分に担保することが可能となった。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和5年度は、初年度に調整したシングルセルライブラリーを用いて、次世代シーケンサ―NovaSeq 6000（Illumina）による150 bp pair end sequenceを実施する。得られたシーケンスデータと、前向きに取得する臨床情報を統合的に解析し、臨床診断（PsAとPAO）や罹患関節（体軸病変と末梢病変）、治療反応性による細胞分画の差異を比較検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
令和４年度は、患者リクルートと検体採取およびシングルセルライブラリー調整に時間を要したことによる。次年度は、この調整したシングルセルライブラリーを用いて、次世代シークエンサーにて150 bp pair end sequenceを実施する。
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