アルドステロン産生腺腫におけるWNTシグナルの新規制御因子に着目した病態解析

2022 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 22K08646
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 村上 正憲 東京医科歯科大学, 東京医科歯科大学病院, 助教 (00740432)
• 研究期間 (年度): 2022-04-01 – 2025-03-31
• キーワード: 内分泌学 / 高血圧学 / オミクス解析 / アルドステロン / 副腎腫瘍

研究実績の概要

近年のオミクス解析の発展に伴い、アルドステロン産生腺腫（APA）の分子生物学的特徴の理解が進んでいる。ステロイド合成酵素の免疫染色の結果からAPA組織の腫瘍内不均一性が予想されており、APAの発症メカニズムを理解する上で重要と考えられるが、従来のbulk RNA-seqによるアプローチでは詳細な解析が困難であった。今回、Single Nucleus RNA-seq解析（snRNA-seq）を行い、APA特異的なクラスターの抽出とその特徴を解析した。非機能性副腎腫瘍（NF）、APAの2種類の凍結腫瘍検体より核抽出を実施し、FACSで精製を行った。BD Rhapsodyで核とバーコード付きビーズを結合し、逆転写の後にTAS-Seqによるライブラリー調整およびシーケンシングを行い、Seuratで解析を実施した。NF：2188個、APA：3993個の計6181個の核が解析できた。NFとAPAを比較し、アルドステロン合成酵素をマーカーとするAPAに特異的な複数のクラスターを同定した。擬似時系列解析により、それらのクラスター間の関係は、ステロイド合成酵素の発現量に応じた分化度の違いを反映していると推定された。さらにAPA 37症例のbulk RNA-seqのデータを使用し、snRNA-seqに基づきdeconvolution解析によってクラスターの構成を推定したところ、同一の体細胞変異を有するAPA間でもクラスターの構成に不均一性があることがわかった。腫瘍検体を用いたsnRNA-seqはAPAの腫瘍内、並びに腫瘍間不均一性の評価とその病態への関わりの解析に有用である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

副腎組織を対象にしたシングル核解析技術の確立に成功しており、おおむね順調であると考えられる。

今後の研究の推進方策

進捗は順調であり、解析症例の対象数を増やして知見の蓄積と機能解析を行う。

研究成果

• [国際共同研究] チューリッヒ大学病院(スイス)
  • 国名: スイス
  • 外国機関名: チューリッヒ大学病院
• [国際共同研究] ルートヴィヒマクシミリアン大学ミュンヘン(ドイツ)
  • 国名: ドイツ
  • 外国機関名: ルートヴィヒマクシミリアン大学ミュンヘン
• [雑誌論文] International multicenter survey on screening and confirmatory testing in primary aldosteronism (2023)
  • 著者名/発表者名: Naruse Mitsuhide、Murakami Masanori、Katabami Takuyuki、Kocjan Tomaz、et al.
  • 雑誌名: European Journal of Endocrinology 巻: 188 ページ: 1~10
  • DOI: 10.1093/ejendo/lvac002
  • 査読あり
• [雑誌論文] In Situ Metabolomics of Cortisol-Producing Adenomas (2022)
  • 著者名/発表者名: Murakami Masanori、Sun Na、Li Fengxia、Feuchtinger Annette、Gomez-Sanchez Celso、Fassnacht Martin、Reincke Martin、Bancos Irina、Walch Axel、Kroiss Matthias、Beuschlein Felix
  • 雑誌名: Clinical Chemistry 巻: 69 ページ: 149～159
  • DOI: 10.1093/clinchem/hvac191
  • 査読あり
• [雑誌論文] Heterogeneous circulating miRNA profiles of PBMAH (2022)
  • 著者名/発表者名: Hara Kazunari、Murakami Masanori、Niitsu Yoshihiro、Takeuchi Akira、Horino Masato、Shiba Kumiko、Tsujimoto Kazutaka、Komiya Chikara、Ikeda Kenji、Tsuiki Mika、Tanabe Akiyo、Tanaka Toshihiro、Yokoyama Minato、Fujii Yasuhisa、Naruse Mitsuhide、Yamada Tetsuya
  • 雑誌名: Frontiers in Endocrinology 巻: 13 ページ: 1~14
  • DOI: 10.3389/fendo.2022.1073328
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Long‐term effects of primary aldosteronism treatment on patients with primary aldosteronism and chronic kidney disease (2022)
  • 著者名/発表者名: Nakano Yujiro、Murakami Masanori、Hara Kazunari、Fukuda Tatsuya、Horino Masato、Takeuchi Akira、Niitsu Yoshihiro、Shiba Kumiko、Tsujimoto Kazutaka、Komiya Chikara、Yokoyama Minato、Ikeda Kenji、Yoshimoto Takanobu、Fujii Yasuhisa、Yamada Tetsuya
  • 雑誌名: Clinical Endocrinology 巻: 98 ページ: 323～331
  • DOI: 10.1111/cen.14849
  • 査読あり
• [雑誌論文] The metabolic phenotype of patients with primary aldosteronism: impact of subtype and sex ? a multicenter-study of 3566 Caucasian and Asian subjects (2022)
  • 著者名/発表者名: Spyroglou Ariadni、Handgriff Laura、M?ller Lisa、Schwarzlm?ller Paul、Parasiliti-Caprino Mirko、Fuss Carmina Teresa、Remde Hana、Hirsch Anna、O’Toole Samuel Matthew、Murakami Masanori, et al.
  • 雑誌名: European Journal of Endocrinology 巻: 187 ページ: 361～372
  • DOI: 10.1530/EJE-22-0040
  • 査読あり
• [学会発表] 右副腎に認められた２つの腺腫で異なるKCNJ5体細胞変異を有した原発性アルドステロン症. (2022)
  • 著者名/発表者名: 原 一成, 村上 正憲, 池田 賢司, 小宮 力, 辻本 和峰, 柴 久美子, 重松嵩朗, 中村 祐基, 藤井 靖久, 小柳 杏莉, 山本 浩平, 明石 巧, 山田 哲也.
  • 学会等名: 第95回日本内分泌学会学術総会
• [学会発表] 再発時にMIBGシンチグラフィ陰性となったパラガングリオーマの一例. (2022)
  • 著者名/発表者名: 村田 真麻, 村上 正憲, 原 一成, 平野 瑛子, 兼田 稜, 柴 久美子, 辻本 和峰, 小宮力, 池田 賢司, 新宅 洋, 大野 十央, 朝蔭 孝宏, 横山 みなと, 藤井 靖久, 山田 哲也.
  • 学会等名: 第23回日本内分泌学会 関東甲信越支部学術集会