| 研究課題/領域番号 |
22K08900
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| 研究機関 | 和歌山県立医科大学 |
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研究代表者 |
速水 晋也 和歌山県立医科大学, 医学部, 講師 (00468290)
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| 研究分担者 |
上野 昌樹 和歌山県立医科大学, 医学部, 准教授 (90405465)
宮本 篤 和歌山県立医科大学, 医学部, 助教 (00756570)
山上 裕機 和歌山県立医科大学, 医学部, 学長特命教員(特別顧問) (20191190)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 肝内胆管癌 / SMYD2 / メチル化 / オルガノイド / CRISPR/Cas9 |
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| 研究実績の概要 |
i) 胆管癌オルガノイドの樹立
がんオルガノイド「F-PDO」の胆管癌由来RBIL001-2 (F_PDO_000012) を用いて、F-PDOプロトコールに則り、専用の培養液Cancer Cell Expansion Media plus（032-25745, 富士フイルム和光純薬）にて継代、3D立体構造を確認した。
ii) オルガノイドSMYD2発現解析－免疫化学染色
樹立培養したRBIL001-2におけるSMYD2発現解析として免疫化学染色を行った。抗SMYD2抗体（mouse monoclonal, sc-393827; Santa Cruz Biotechnology）および二次抗体Goat Anti-Mouse IgG H&L (Alexa Fluor® 594; ab150116, abcam)を使用、当大学に設置されている 共焦点レーザー走査型顕微鏡（ZEISS Confocal Laser Scanning Microscope Model LSM780）にて観察した。
iii) SMYD2抑制系実験システムの構築：CRISPR/Cas9によるSMYD2抑制系の構築
オルガノイドにおけるSMYD2抑制系として、CRISPR/Cas9遺伝子改変技術を使用した。Manufacturers’ protocolに則り、Lipofectamine 3000 (Thermo Fisher Scientific)によるリポフェクタミン法でSMYD2 CRISPRプラスミド(h)（sc-403129; Santa Cruz Biotechnology）を導入した。免疫化学染色にてSMYD2の蛍光低下ないし消失を確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定・計画通り研究を遂行できている。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の計画書通り研究を進める。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
4,285円の端数的な残高が生じ、次年度に繰り越して実験などに使用する。
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