研究課題
本年度は、マウス尾からの単離した線維芽細胞シートの樹立およびその線維芽細胞シートの凍結保存の検討を行った。C57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの尾から線維芽細胞を単離し、線維芽細胞シートを作製した。線維芽細胞シートを凍結保存する細胞保存液を検討するために、DMSOを含有している細胞保存液、DMSOを含有していない細胞保存液を使用して、線維芽細胞シートを3Dフリーザーで凍結後に、-80℃で保存し、その後、解凍して培養した時の細胞生存率を細胞代謝試薬で評価した。コントロールとして、非凍結の線維芽細胞シートの細胞生存率を100%としたところ、DMSOを含有している細胞保存液で凍結したC57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの線維芽細胞シートの細胞生存率は約80%前後であったが、DMSOを含有していない細胞保存液で凍結したC57BL/6マウスおよびC3H/HEマウスの線維芽細胞シートの細胞生存率は約25-60%前後であったことから、本研究では、細胞保存液はDMSO含有を使用することにした。非凍結線維芽細胞シートおよび3Dフリーザーで凍結保存した線維芽細胞シートを解凍して培養した時に、線維芽細胞シートが分泌する成長因子をELISAで解析したところ、非凍結線維芽細胞シートの分泌能を100%とすると、凍結保存した線維芽細胞シートのVEGF、HGF、SDF-1の分泌能は、約60-80%であった。
2: おおむね順調に進展している
マウス線維芽細胞シートの凍結条件を決めることが出来た。また、凍結解凍後のマウス線維芽細胞シートの細胞生存率および成長因子の分泌能を確認することが出来たため。
マウス皮膚潰瘍モデルに対して、自家線維芽細胞シートおよび他家線維芽細胞シートを非凍結および凍結保存したものを移植することで、その治療効果を検証する。
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American Journal of Translational Research
巻: 14 ページ: 3879-3892
