| 研究課題/領域番号 |
22K08959
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
上野 耕司 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (30736070)
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| 研究分担者 |
石井 治之 山口大学, 大学院創成科学研究科, 准教授 (80565820)
溝口 高弘 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (90844796)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 細胞外小胞 / 血管新生 |
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| 研究実績の概要 |
293T細胞を浮遊培養で培養し、その培養液からエクソソームの分画を限外濾過により、濃縮する実験を行った。
膜分画が100Kで、素材がPESおよびHydroasartでの培養液の濃縮の違いを検討した。293T細胞の浮遊培養により得た培養液1000mLを500mLずつに分けて、PESおよびHydroasartでの限外濾過の比較実験を行い、濃縮を行った。培養液500mLを約25mLに濃縮するのに、PESでは約155分の時間を要したが、Hydrosartでは約67分の時間を要した。濃縮前および濃縮後の培養液中のエクソソームの濃度をCD9/CD63 ELISA Kitで測定したところ、濃縮前の培養液中のエクソソーム濃度は1349pg/mLであった。濃縮後の培養液中のエクソソーム濃度は、100KのHydrosartで濃縮した場合は19327pg/mL、100KのPESで濃縮した場合は15487pg/mLであった。
PESの10Kおよび50Kでも同様の実験を実施したが、100Kによる限外濾過の方が、エクソソームの単離が良い結果であった、
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
実験室レベルのサイズの限外濾過装置で、培養液を濃縮しても、エクソソームが効率的に濃縮されている結果を得ることが出来たため。
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| 今後の研究の推進方策 |
限外濾過により濃縮したエクソソームの機能を確認する必要があると考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由は、予定よりも、濾過膜や培地の購入費を抑えることができた為である。使用計画としては、エクソソームの機能解析に必要な試薬の購入費の予定である。
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