| 研究課題/領域番号 |
22K09254
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
荒木 芳生 名古屋大学, 医学系研究科, 客員研究者 (80467290)
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| 研究分担者 |
金森 史哲 名古屋大学, 医学系研究科, 特任助教 (00905979) [辞退]
大岡 史治 名古屋大学, 医学系研究科, 講師 (10725724)
横山 欣也 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (90867904)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | 小児もやもや病 / 次世代シークエンシング / 病変部血管 / 網羅的遺伝子発現解析 |
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| 研究実績の概要 |
もやもや病好発年齢、進行期である20歳以下の患者検体は、中高年以降の患者と比較して病変部動脈壁の菲薄化がさらに進行しており、western blotを行う上で十分量の蛋白が得られないと判断した。そこで2022年度は次世代シークエンシングを用いて、20歳未満の患者群、対照群についてトランスクリプトームを行うことで、病変部におけるCOL12A1の発現について検索を行うこととしたが、特にもやもや病群において、次世代シークエンシングにおいてマッピング率が50%を下回るなど極端に低い値となっていた。開始total RNA量が微量であることが原因として想定された。2023年度はこれまでのプロトコールよりもさらに微量の開始toral RNA量からライブラリ作成が可能なsingle cellを対象としたＮＧＳライブラリ作成キットを用いたプロトコールの作成を目指し研究を行った。その結果、これまでの方法と比べて高いライブラリ収量を得ることが出来るようになった。これまでの研究での実験で小児もやもや病患者検体を使用したため、現在新たな検体の集積を行っており、2024年度は新しいプロトコールで作成したライブラリに対する次世代シークエンシングを行う予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
特にもやもや病患者の病変部検体に含まれる蛋白やtotal RNA量が想定よりも微量であったこと、2022年度までの実験において、小児もやもや病患者検体を使用したため、新たに検体の集積が必要になったことが原因として挙げられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
2024年度は新しいプロトコールで作成したライブラリに対する次世代シークエンシングを行い、小児もやもや病病変部における網羅的遺伝子発現解析を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じたものの、端数が生じたことによる少額のものであり、2024年度に研究計画通りに使用されるものと考えている。
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