| 研究課題/領域番号 |
22K09290
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
米澤 大 鹿児島大学, 医歯学域鹿児島大学病院, 助教 (50550076)
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| 研究分担者 |
比嘉 那優大 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 助教 (90792200)
内田 裕之 鹿児島大学, 医歯学域鹿児島大学病院, 特任助教 (80404482)
吉本 幸司 九州大学, 医学研究院, 教授 (70444784)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | グリオーマ / オートファジー / テモゾロミド / 耐性機序 |
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| 研究実績の概要 |
U251をtemozolomide (TMZ) 含有培地で培養し、限界希釈法にて単離したTMZ耐性株を樹立し、研究に用いた。U251および U251由来TMZ耐性株 (U251/TMZ-R) それぞれをTMZ含有培地で培養の後、autophagyの指標である、isoform B of microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ (LC3B-Ⅱ)、caspase-3をwestern blottingにて検出し、比較した。また、TMZ暴露後のLC3Bの凝集を蛍光顕微鏡にて観察した。さらに、autophagosomeとlysosomeの融合阻害剤であるbafilomycin A1 (BA) をTMZと併用時での検討を行った。細胞生存率の評価にはMTT assayを用いた。
LC3B-Ⅱの増加およびLC3Bの凝集は、U251/TMZ-RではU251に比べ抑制されていた。cleaved caspase-3の出現は、U251でのLC3B-Ⅱの増加の後に観察されたが、U251/TMZ-Rでは観察されなかった。BA併用下では、U251/TMZ-RにおいてもTMZによるLC3B-Ⅱ増加は、U251と同様に誘導され、cleaved caspase-3の出現および生存率の低下が観察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
臨床業務をこなしつつ、上述のような基礎実験、基礎研究を行っているために、十分な研究時間が確保できにくいことが最大の理由である。
また、分担研究者の異動などにより、分担研究者が担当する検証実験が十分に行えなかったことも、進捗状況に影響を与えている。
また、western blottingにおいて、検出対象である、LC3Bおよびcleaved caspase 3のバンドの検出が困難で、様々な実験条件検討を繰り返したことで進捗が遅れた状況となった。
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| 今後の研究の推進方策 |
研究代表者自身の臨床業務を縮小し、研究に充てる時間を確保する。
それと共に、新たに分担研究者を申請し、その者との実験、研究を分担して進めてゆくことで、今後の研究を推進してゆく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
十分な研究時間が確保できなかったため、研究費を使用することがなかった。
次年度の研究計画に繰り越して使用する予定である。
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