| 研究課題/領域番号 |
22K09676
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
廣田 朝光 東京慈恵会医科大学, 医学部, 准教授 (50435674)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | Aspergillus fumigatus / 網羅的遺伝子発現解析 / 遺伝的多様性 |
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| 研究実績の概要 |
エアコン等の空調設備にしばしば認められるAspergillus fumigatus (以下、Af) は、アレルギー性気管支肺真菌症やアレルギー性真菌性副鼻腔炎などのアレルギー性の上下気道疾患を引き起こす主要な病原微生物としてよく知られている。Afの下気道での報告が多くなされている一方、上気道における応答性については不明な点も多い。また、Afに対する応答性にZNF 77遺伝子のバリアントが関わることも近年報告されている。
本研究では、1. 鼻粘膜上皮細胞のAfに対する遺伝子応答の網羅的解析、2. 日本人におけるAfに対する応答性の遺伝的多様性の検証、3. Af特異的IgE抗体陽性、及び、陰性症例の擦過鼻粘膜上皮細胞の網羅的遺伝子発現解析の３つの検証を中心に行うことにより、上下気道におけるAfの関与するアレルギー疾患の新たな予防法、治療法の開発へ繋がる新たな知見を創出することを目的としている。
初年度は、前述2に関して、報告のあったZNF77 の ナンセンスバリアント (rs35699176, p.Gln100Ter)およびその他のコーディング領域におけるバリアントの有無について、48名の慢性副鼻腔炎患者のゲノムDNAを用いて、ダイレクトシークエンス法にて行なった。報告のあったナンセンスバリアントは (rs35699176) 48名の慢性副鼻腔炎患者の中では同定できなかった。しかし、アミノ酸を変化させるミスセンスバリアントを2箇所同定した。
また、前述3に関して、擦過鼻粘膜上皮細胞からより高品質RNAを取得するため、取得方法についていくつか検証を行なった。その結果、RIN > 7を満たす高品質なTotal RNAをコンスタントに取得できる方法を確立した。このTotal RNAを用いてRNA-Seqを行い、通常の解析が問題なく実施できることを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
予定している3つの検証のうち、2つの検証 (前述2及び3)について研究を進めることができた。それぞれ重要なキーとなる検証は終えることができたので、今後は、Af特異的IgE抗体陽性、及び、陰性症例数を増やすなどの作業を進めていく予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
初年度に実施できなかった鼻粘膜上皮細胞のAfに対する遺伝子応答の網羅的解析について、粘膜上皮細胞の気相液相界面培養を確立する予定である。前述の2及び3についての検証についても、N数を増やすなど実施していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
比較的コストのかかる粘膜上皮細胞の気相液相界面培養を実施しなかったことと、RNA-Seqも安定的な高品質RNAの取得を中心に行なったため、費用が抑えられた。2年目は、初年度の残予算とあわせて、初年度に未実施の比較的コストのかかる検証を進めていく。
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