| 研究課題/領域番号 |
22K10175
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
片山 郁夫 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (80295089)
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| 研究分担者 |
佛坂 由可 長崎大学, 病院(歯学系), 講師 (10244089)
佐々木 美穂 長崎大学, 病院(歯学系), 助教 (10437874)
田代 茂樹 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (20300882)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | cPLA2 / 低酸素 / HIF-1α |
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| 研究実績の概要 |
本年度は低酸素適応応答に対するcPLA2の関与について検討した。この実験にはcPLA2WTマウスおよびcPLA2KOマウスの肺から分離したcPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞を使用した。
まず、cPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞を低酸素状態で培養し、細胞死の違いをFACS解析で検討した。その結果、cPLA2(+/+)では約54%の細胞に細胞死がみられたのに対して、cPLA2(-/-)では約20%の細胞にしか細胞死がみられなかった。このことから、cPLA2が低酸素適応応答に関与している可能性が示唆された。
さらに、cPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞に低酸素刺激を行い、低酸素適応応答に中心的な役割を果たす遺伝子であるHIF-1αの発現をウエスタンブロット法で検討した。その結果、cPLA2(-/-)ではcPLA2(+/+)と比較してHIF-1αの発現が抑制されることが確認された。
以上のことから、cPLA2はHIF-1αの発現に何らかの影響を与えており、そのことによってcPLA2が低酸素適応応答に関与しているのではないかということが示唆された。
また、低酸素刺激によるDNA損傷応答に対するcPLA2の関与を調べるために、cPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞に低酸素刺激を行い、ATMのリン酸化およびH2AXのリン酸化についてウエスタンブロット法で検討した。その結果、低酸素刺激によるATMのリン酸化やH2AXのリン酸化についてはcPLA2(-/-)とcPLA2(+/+)の両方で確認されDNA損傷応答が起こることがわかったが、cPLA2(-/-)とcPLA2(+/+)に発現のタイミングや発現量に差はみられなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
cPLA2の低酸素適応応答への関与を確認することができたが、低酸素細胞の放射線抵抗性におけるcPLA2の働きについてはまだ検討できていないため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、低酸素細胞の放射線抵抗性におけるcPLA2の働きについて検討するために、cPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞に低酸素環境下でエックス線照射を行い、DNA損傷応答遺伝子の発現の違いを明らかにしたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）cPLA2の低酸素適応応答への関与を確認することができたが、低酸素細胞の放射線抵抗性におけるcPLA2の働きについては検討できなかった。また参加を予定していた日本歯科放射線学会第６２回学術大会（岐阜県）および日本歯科放射線学会第３回秋季学術大会（北海道）がZoomによるWeb開催となり旅費を使用しなかった。
（使用計画）遺伝子解析に必要な抗体・試薬の購入、および日本歯科放射線学会第６３回学術大会（福岡県）および日本歯科放射線学会第４回秋季学術大会（大阪府）への旅費に充てる予定である。
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