| 研究課題/領域番号 |
22K11433
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
掛橋 千彰 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 研究技術員 (80535683)
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| 研究分担者 |
舩橋 利也 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 教授 (70229102)
萩原 裕子 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 講師 (90468207)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | Sema3a / 遅筋 / 速筋 / ケトン / Floxマウス / AAV / Cre |
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| 研究実績の概要 |
ケトン餌による骨格筋の遅筋化にSama3aが関与しているのかを明らかにすることを目的として、Sema3a floxマウスとACTA1 -Creマウスを掛け合わせて、骨格筋特異的にタモキシフェンでSama3aがknockoutされるマウスを作成することを試みた。しかし、Sama3aがknockoutされた筋繊維とそうでないものが混在する、つまり、キメラのほうが解析に有利と考え、AAVでCreを発現させることにした。こうすることによりAAVを発現した筋繊維ではSema3aがknockoutされ、発現していない筋繊維ではSama3aが機能している。したがって本年度は、１）骨格筋に発現するAAVベクターの探索、２）筋繊維タイプの解析、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。その結果、１）MyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40の作成、２）前脛骨筋（Tibialis anterior: TA）、長趾伸筋（Extensor digitorum longus: EDL），腓腹筋（Gastrocnemius: GC），ヒラメ筋（Soleus: SOL）を摘出する方法を確立し、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、laminin、Sema3aの３重蛍光免疫染色の最適化、３）Sema3a floxマウスの導入、を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ケトン餌による遅筋化にSema3aが関わるのか、の解析のためのツールは全て整い、現在、遅筋化について解析を進めているので、全行程の25%程度は消化していると考えられるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、Sema3Aのfloxマウスの腓腹筋にMyoAAV2A-.CMV.HI.eGFP-Cre.WPRE.SV40を発現させ、ケトン餌で飼育の前脛骨筋、長趾伸筋）ヒラメ筋の遅筋化を、Type Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx、の各筋繊維タイプの変化とSema3aの関係を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
消耗品などの節約に心がけ、また、コロナの影響で対面形式とせず学会にon lineで参加したため旅費として費用がかからなかった。今後は、実際に筋特異的に発現するAAVを構築し、Sema3a-floxマウスをケトン餌で飼育し、遅筋化に対する筋細胞特異的Cre発現が及ぼす影響について解析するのに多少予算が必要なので、それに充填する。
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