| 研究課題/領域番号 |
22K15081
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
鈴木 智大 群馬大学, 生体調節研究所, 助教 (00804775)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | SunTag / H3K9me2 / エピゲノム制御 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、昨年度に引き続き、計画①: SunTag-SETDB1によるH3K9me3を介した標的遺伝子の発現制御の確認、計画②: SunTag-SETDB1によるH3K9me3を介した標的遺伝子の発現制御の確認、および、計画③: gRNAライブラリーを利用したSunTag-SETDB1スクリーニングに取り組むことを計画していた。
計画①に関して、2022年度は3T3-L1細胞にpaP2-GFPをpiggyBacシステムによって導入した安定発現株を樹立した。当該細胞株は分化とともにGFPシグナルの増加が見られ、当初の目的通りレポーター細胞株の樹立に成功した。一方、細胞間でGFP蛍光にばらつきが認 められたため、当初の予定を変更し、本年度はレポーター細胞をクローニングすることとした。クローニングによって、候補細胞株を10ライン程度得られたため、当該細胞ラインの中で分化とともにGFP発現が増加する細胞を選別し、計画②においてCebpa領域にSunTag因子を動員した場合に、脂肪細胞分化の抑制を認めるかどうかを検証する予定である。また、計画③に関して、gRNAライブラリの作製するに当たり、遺伝子のどの領域を標的とするべきかの検証を行った。Cebpaのプロモーター領域、遺伝子領域に広くgRNAライブラリを作成し、脂肪細胞分化におけるCebpaの遺伝子発現上昇を抑制しうる領域を検討したところ、特にプロモーター領域にSunTag因子を動員した場合にCebpaの遺伝子発現低下を認めた。このことから、今後の計画③のスクリーニングに用いるgRNAライブラリは、遺伝子のプロモータ領域を標的として行うこととした。
2024年度は、計画②、計画③、および、計画④: SunTag-SETDB1標的領域のH3K9me3修飾とクロマチン凝集状態の評価を実施する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
計画①「aP2レポーター遺伝子およびSunTag-SETDB1発現細胞の作製」でレポーター細胞のクローニングが必要になった関係で、本年度はクローニングを行った。計画②と計画③はやや遅延しているが、一部開始している。
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| 今後の研究の推進方策 |
スクリーニングに適したaP2-GFP細胞を選別した後、計画②ー④を本実施する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
一部研究計画に遅れが生じたため、次年度の利用とすることとした。繰越額については、2023年度分の研究計画の実施に利用する予定である。
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