| 研究実績の概要 |
昨年度までに確立したミトコンドリア内RNA特異的ラベル化法により同定した候補遺伝子の詳細な解析を行った. まずRNAが輸送されるメカニズを解析するために, in vito RNA輸送再構成系の構築を目指した. 過去の研究では放射性同位体を用いたRNA輸送再構成が報告されているが, より簡便かつ安定した手法の構築を検討した. 酵母から単離した蛍光標識したミトコンドリアと, in vitro転写により別の蛍光色素でラベルしたRNAを用いて顕微鏡下でミトコンドリアへ輸送されたRNAの検出に成功した. これまでの近位依存性標識法とRNA細胞内局在と合わせて, in vitroでの輸送が確認できたことから, 本研究により同定したRNAがミトコンドリアへ輸送されることが明らかとなった. 次に, 同定した遺伝子の機能解析を行うために, 様々な条件で培養した酵母株での同定したRNAの細胞内局在をFISHにより観察した. その結果, ミトコンドリアストレス条件下において同定したRNAがミトコンドリアに蓄積したことから, ミトコンドリアに輸送されたRNAはミトコンドリアのストレスに応答して何らかの機能を発揮する可能性が示唆された.
研究期間を通して, ミトコンドリアへ輸送されるRNAの新規探索手法開発および, 候補遺伝子が真にミトコンドリアへ輸送されることを検証する一連の実験系の構築を行った. この解析から, 新規遺伝子の同定に成功し, 出芽酵母におけるミトコンドリアでの機能についても一定の知見が得られた.
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