| 研究課題/領域番号 |
22K15425
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
倉重 真沙子 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (10836422)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | CAR細胞 / 造血幹細胞ニッチ / 骨髄線維症 / 造血幹細胞移植 |
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| 研究実績の概要 |
造血幹細胞ニッチの研究においては、CXCL12やSCFなどのサイトカインの遺伝子発現解析に、従来はFACSとqRT-PCRを組み合わせた方法が用いられており、近年ではシングルセル解析も実施されている。しかしながら、これらの方法では対象となる細胞を組織から単離する必要があり、結果としてターゲット細胞の組織内局在に関する情報が失われてしまう。我々は、骨髄線維症（MF）の造血微小環境を正確に解析するためには、骨髄組織を1細胞レベルでin situで解析する組織学的手法が不可欠であると考え、蛍光免疫染色とRNA in situ hybridizationを同時に行うin situ遺伝子発現解析法やin situキメリズム解析法を確立した。
ヒトの骨髄線維症（MF）の病理組織標本において、in situ遺伝子発現解析法を実施し、MFにおけるCAR細胞がI型コラーゲンの主要な産生細胞であることを確認した。また、MF患者の骨髄髄腔内のCAR細胞の単位面積あたりの数は正常コントロールと比較して有意に増加していた多重蛍光免疫染色を行い、MFにおいてCAR細胞の一部がαSMA陽性細胞に分化することが示唆される結果をえた。さらに、in situ遺伝子発現解析法により、MFの重症例ではCAR細胞におけるCXCL12の発現が低下しているが、造血幹細胞移植後の早期にCAR細胞がCXCL12産生能を回復することが確認された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
造血幹細胞移植前後のCXCL12の推移についての実験内容および結果は当初の計画通りであった。
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| 今後の研究の推進方策 |
検体の収集をさらに進め、in situ キメリズム解析やNGS等を用いた解析を併せて検討する。
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