研究課題
慢性肝疾患は二次性サルコペニアの主因であり、特に肝硬変・肝がん患者においてサルコペニアの合併は予後不良因子となるため、肝疾患合併サルコペニアの発症メカニズム・治療方法の開発は急務である。また肝線維化の改善は肝機能の改善をもたらし予後を延長させるが、肝筋連関を介したサルコペニアへの影響は未だ不明である。これまで、C型肝炎患者に対するインターフェロンフリー治療によりSVRが得られた症例のうち、筋肉量が改善しなかった群で高発現するmiRNAを同定した。同定されたmirRNAが筋肉の分化に影響するか検討するために、マウス骨格筋芽細胞(C2C12)を用いて検討を進めている。まず、C2C12を分化培地で培養し、筋分化マーカーであるmyosin heavy chain (MHC)等のmRNA発現の上昇をPCRで確認した。続いて、候補miRNAをC2C12にトランスフェクションし、miRNAがトランセフェクションされていることを確認した。更に、候補miRNAをトランスフェクションしてから、C2C12を分化培地に変えてmRNA発現やタンパク発現をPCRやウエスタンブロットで評価するとcontrolと比較し分化マーカーの発現が有意に低下していることを確認した。更に、初代培養ヒト骨格筋細胞においても同様の分化誘導の確認及びmiRNAトランスフェクションによる分化抑制を確認した。分化抑制の機序を探索する目的に、通常C2C12細胞と候補miRNAをトランスフェクションした細胞でDNAarrayを実施し筋分化に関連のあるpathwayに着目し、シグナル伝達に関わる因子について検討を進めている。また、in vivoでの検討としてマウスに四塩化炭素を腹腔内投与し肝線維症モデルを作製した。今後、更に検討を進めていく。
2: おおむね順調に進展している
マウス筋芽細胞だけでなくヒト骨格筋細胞での分化抑制も確認できたため。
マウス骨格筋芽細胞における候補miRNAの筋分化抑制のメカニズム解明としてpathway解析で得られた情報を元に、シグナル経路の関与する部分を検討を更に進めmiRNAの関与する因子を探索する。in vivoでは、慢性肝疾患モデルとして作成した四塩化炭素誘導肝線維症マウスモデルにサルコペニアを特徴づける所見が出現しているか、筋分化マーカー発現の違いなどをqRT-PCRを用いて検討する。更に本miRNAの発現を肝硬変患者の血清で評価し筋肉量との関連についても検証を進める。
年度当初コロナ感染のために、動物実験の開始ならびに、細胞実験における蛍光染色評価等に遅延が生じた。これら動物実験及び細胞実験における蛍光染色やシグナル機序解析のためのウエスタンブロット等に使用予定である。
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すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (3件) (うち国際学会 3件)
Frontiers in Nutrition
巻: 10 ページ: 1～10
10.3389/fnut.2023.1272728
