| 研究課題/領域番号 |
22K16971
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
波多野 誠 山口大学, 医学部附属病院, 学術研究員(寄附金) (90860669)
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| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| キーワード | HSF / VEGF / 神経保護 / 網膜変性 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、HSF1ノックアウトマウスを用いた光誘因性網膜変性モデルを用いることでHSF1-HSP-VEGFカスケードを介した網膜神経保護について研究する。研究 実施計画は以下の3つに分けられる。(1)光誘因性網膜変性モデルにおけるVEGFの発現、局在の確認、(2)VEGFによる視細胞のアポトーシスへの変化を確認、 (3)VEGFによるミスフォールディングの変化をin vivoおよびin vitroの実験にて明らかにする。
(1)光誘因性網膜変性モデルにおけるVEGFの発現、局在の確認: 実施中である。抗VEGF抗体の組織染色の条件が難しいため検討中である。現段階ではHSFノックアウトマウスと野生型マウスに明らかな有意差はないようである。
(2)VEGFによる視細胞のアポトーシスへの変化を確認: 未実施である。
(3)VEGFによるミスフォールディングの変化を確認: HSF1ノックアウトマウスに光照射を行い、VEGF発現を確認したが、明らかな染色像が得られなかった。HSP関連蛋白質の発現をPCRにて確認したが、mRNAレベルでの発現において、野生型との明らかな差は認めなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
(1)光誘因性網膜変性モデルにおけるVEGFの発現、局在の確認: 抗VEGF抗体の組織染色の条件が難しいため検討中である。
(2)VEGFによる視細胞のアポトーシスへの変化を確認: VEGFに対するsiRNA、ブロッキング抗体や阻害薬などのマウスへの投与方法について、再現性のあるアッセイの樹立中である。(1)の実験の検討を優先しているため遅れている。
(3)VEGFによるミスフォールディングの変化を確認: HSF1ノックアウトマウスに光照射を行い、VEGF発現を確認したが、明らかな染色像が得られなかった。HSP関連蛋白質の発現をPCRにて確認したが、mRNAレベルでの発現において、野生型との明らかな差は認めなかった。実験条件について再検討中である。
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| 今後の研究の推進方策 |
(1)光誘因性網膜変性モデルにおけるVEGFの発現、局在の確認: 抗VEGF抗体の組織染色の条件が難しいため検討中である。
(2)VEGFによる視細胞のアポトーシスへの変化を確認: VEGFに対するsiRNA、ブロッキング抗体や阻害薬などのマウスへの投与方法について、再現性のあるアッセイの樹立中である。(1)の実験で有意な結果が得られた際には実験を進める予定である。
3)VEGFによるミスフォールディングの変化を確認: HSF1ノックアウトマウスに光照射を行い、VEGF発現を確認したが、明らかな染色像が得られなかった。HSP関連蛋白質の発現をPCRにて確認したが、mRNAレベルでの発現において、野生型との明らかな差は認めなかった。実験条件について再検討中である。またmRNAレベルではなくタンパクレベルでの変化すなわち関連タンパク質の発現、機能抑制などを検討予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
(1)光誘因性網膜変性モデルにおけるVEGFの発現、局在の確認実験、(2)VEGFによる視細胞のアポトーシスへの変化を確認実験、(3)VEGFによるミスフォールディングの変化を確認実験において研究計画に遅れが出たため、本年度に購入予定だった試薬などを未購入である。次年度では本年度で実施できなかったsiRNA、ブロッキング抗体や阻害薬などを用いて、関連タンパク質の発現、機能抑制を試みる。
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