研究課題/領域番号 |
22K19123
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研究機関 | 東北大学 |
研究代表者 |
中山 亨 東北大学, 工学研究科, 教授 (80268523)
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研究期間 (年度) |
2022-06-30 – 2025-03-31
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キーワード | ゴマリグナン / β-グルコシダーゼ / セサミノール |
研究実績の概要 |
ゴマのゲノムデータ及びゴマ種子におけるコンティグ配列データを用いた網羅的解析により,グリコシドヒドロラーゼファミリー1(GH1;植物特化代謝産物配糖体を加水分解するβ-グルコシダーゼを多く含む)およびGH3(既往の細菌セサミノール配糖体分解酵素を含む)に属する16種類の候補遺伝子を選抜した.これらの候補遺伝子のそれぞれを,大腸菌を宿主として異種発現させ,発現産物の酵素活性を評価した.しかしながら,選抜された候補遺伝子の発現産物の中には,セサミノールトリグルコシド(STG)分解能を示すものは見出されなかった.ゴマ種子においては,発芽後1日目までは配糖体化活性が顕著であり,特にセサミノールモノグルコシド(SMG)からセサミノールジグルコシドβ(1→2) (2SDG)への変換活性が最も高い.これ対して,β-グルコシダーゼ活性は発芽後3日目のゴマ種子において最も強く,β(1→6) 結合加水分解活性 [STGから2SDGを生成する活性と,セサミノールジグルコシドβ(1→6) (6SDG)からSMGを生成す活性] のみが存在する.そこでこの活性の推移に基づいて,ゴマ種子中においてβ(1→6) 結合の分解を司るβ-グルコシダーゼ活性の単離を試みた.STG分解活性を指標としてゴマ種子の粗酵素液から,各種のカラムクロマトグラフィーを用いて同酵素活性の本体となるタンパク質を精製した.最終精製ステップ(ヒドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィー)後の活性画分に対してプロテアーゼ処理を行い,得られたペプチドをLC-MSMS分析に供した.得られた結果をゴマのゲノムデータベースの発現遺伝子リストと参照した結果.候補遺伝子SiBGL9が同定された.
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本課題の実施に関わる研究棟の改修工事の大幅な遅延により,研究の遅延を余儀なくされている.
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今後の研究の推進方策 |
研究棟の改修工事の完了後,速やかに研究を再開し,遂行させる.
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次年度使用額が生じた理由 |
本課題の実施に関わる研究棟の改修工事の大幅な遅延により,研究の遂行が困難であった.研究棟の改修工事終了の目処(2024年秋以降)が立てば,速やかに予算執行する.
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